中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
5期
429-432
,共4页
张壮苗%杨春%靳志栋%何永林%徐蕾%王静娴%董志玲%李岱容
張壯苗%楊春%靳誌棟%何永林%徐蕾%王靜嫻%董誌玲%李岱容
장장묘%양춘%근지동%하영림%서뢰%왕정한%동지령%리대용
MTB%Ipr1%PPE68%DNA疫苗%免疫应答
MTB%Ipr1%PPE68%DNA疫苗%免疫應答
MTB%Ipr1%PPE68%DNA역묘%면역응답
目的 构建Ipr1/ PPE68共表达穿梭质粒pBIPO (pBud-Ipr1-PPE68-OriM),探讨其诱导BALB/C小鼠的免疫应答特征.方法 将Ipr1基因和PPE68编码序列以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的复制子OriM分别插入质粒pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,经酶切测序及Western blotting鉴定后,用其免疫BALB/c小鼠,于末次免疫后2w处死小鼠,ELISA法分别检测小鼠血清中lgG2a、IL-12及IFN-γ的水平,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞数量,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖,同时观察肺脾组织病理学变化.结果 酶切测序鉴定PPE68和Ipr1基因序列与理论值相符,Western-blotting鉴定PPE68和Ipr1蛋白表达成功.质粒pBIPO免疫后小鼠血清中的lgG2a、IFN-γ及IL-12水平与CD4+和CD8+T细胞表达均呈现出有意义的提高,脾淋巴细胞增殖与BCG组相比差异无统计学意义,肺脾组织未见病理学改变.结论 成功构建DNA疫苗(pBIPO),该疫苗能够有效诱导BALB/c小鼠的细胞免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定基础.
目的 構建Ipr1/ PPE68共錶達穿梭質粒pBIPO (pBud-Ipr1-PPE68-OriM),探討其誘導BALB/C小鼠的免疫應答特徵.方法 將Ipr1基因和PPE68編碼序列以及結覈分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的複製子OriM分彆插入質粒pBudCE4.1的多剋隆位點,構建共錶達穿梭質粒pBIPO,經酶切測序及Western blotting鑒定後,用其免疫BALB/c小鼠,于末次免疫後2w處死小鼠,ELISA法分彆檢測小鼠血清中lgG2a、IL-12及IFN-γ的水平,流式細胞儀檢測CD4+和CD8+T細胞數量,MTT法檢測特異性脾淋巴細胞增殖,同時觀察肺脾組織病理學變化.結果 酶切測序鑒定PPE68和Ipr1基因序列與理論值相符,Western-blotting鑒定PPE68和Ipr1蛋白錶達成功.質粒pBIPO免疫後小鼠血清中的lgG2a、IFN-γ及IL-12水平與CD4+和CD8+T細胞錶達均呈現齣有意義的提高,脾淋巴細胞增殖與BCG組相比差異無統計學意義,肺脾組織未見病理學改變.結論 成功構建DNA疫苗(pBIPO),該疫苗能夠有效誘導BALB/c小鼠的細胞免疫應答,為進一步研究其抗MTB的免疫保護作用奠定基礎.
목적 구건Ipr1/ PPE68공표체천사질립pBIPO (pBud-Ipr1-PPE68-OriM),탐토기유도BALB/C소서적면역응답특정.방법 장Ipr1기인화PPE68편마서렬이급결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis,MTB)적복제자OriM분별삽입질립pBudCE4.1적다극륭위점,구건공표체천사질립pBIPO,경매절측서급Western blotting감정후,용기면역BALB/c소서,우말차면역후2w처사소서,ELISA법분별검측소서혈청중lgG2a、IL-12급IFN-γ적수평,류식세포의검측CD4+화CD8+T세포수량,MTT법검측특이성비림파세포증식,동시관찰폐비조직병이학변화.결과 매절측서감정PPE68화Ipr1기인서렬여이론치상부,Western-blotting감정PPE68화Ipr1단백표체성공.질립pBIPO면역후소서혈청중적lgG2a、IFN-γ급IL-12수평여CD4+화CD8+T세포표체균정현출유의의적제고,비림파세포증식여BCG조상비차이무통계학의의,폐비조직미견병이학개변.결론 성공구건DNA역묘(pBIPO),해역묘능구유효유도BALB/c소서적세포면역응답,위진일보연구기항MTB적면역보호작용전정기출.
