中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2012年
4期
263-269
,共7页
陈保文%都伟欣%杜蓉%闫李侠%郭磊%杨蕾%王国治
陳保文%都偉訢%杜蓉%閆李俠%郭磊%楊蕾%王國治
진보문%도위흔%두용%염리협%곽뢰%양뢰%왕국치
分枝杆菌属%分枝菌酸%色谱法,高压液相%细菌分型技术%序列分析,DNA%16S rRNA
分枝桿菌屬%分枝菌痠%色譜法,高壓液相%細菌分型技術%序列分析,DNA%16S rRNA
분지간균속%분지균산%색보법,고압액상%세균분형기술%서렬분석,DNA%16S rRNA
目的 比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和 16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同.方法 将<伯杰细菌鉴定手册>中载入的 49 种分枝杆菌模式株接种于改良罗氏培养基上,置于最适温度下孵育.挑取生长良好且无污染的培养物,一部分经皂化和酸化提取分枝菌酸并衍生后,采用反相高效液相色谱法进行分枝菌酸指纹图谱构建;另一部分经裂解和 PCR 扩增,获得 DNA,纯化后,采用核酸分析仪进行 16S rRNA 序列测定.结果 49 种分枝杆菌模式株中,采用 RP-HPLC 分析时,单簇峰的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和胃分枝杆菌,双簇峰的爱知分枝杆菌和罗德岛分枝杆菌,三簇峰的南非分枝杆菌和母牛分枝杆菌共 7 种因各组内相对保留时间和相对峰高比值相近而难以进行鉴别;采用 16S rRNA 序列分析法分析时,产鼻疽分枝杆菌和塞内加尔分枝杆菌、溃疡分枝杆菌和海分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌、龟亚分枝杆菌和龟脓分枝杆菌以及结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌和非洲分枝杆菌)共 12 种因各组内基因序列相似性百分比为 100% 而难以进行鉴别.通过两种分型鉴别方法的比较,可见除结核分枝杆菌和牛分枝杆菌外,两种分型方法相互补充,可将 49 种分枝杆菌模式株中的 47 种进行明确鉴别.结论 分枝菌酸 RP-HPLC 和 16S rRNA 序列分析法均为分枝杆菌的分型鉴定提供了准确和有效的技术方法.两种方法相互借鉴能准确地将大多数分枝杆菌鉴定到种.
目的 比較反相高效液相色譜法(RP-HPLC)和 16S rRNA序列分析法對分枝桿菌分型鑒彆的異同.方法 將<伯傑細菌鑒定手冊>中載入的 49 種分枝桿菌模式株接種于改良囉氏培養基上,置于最適溫度下孵育.挑取生長良好且無汙染的培養物,一部分經皂化和痠化提取分枝菌痠併衍生後,採用反相高效液相色譜法進行分枝菌痠指紋圖譜構建;另一部分經裂解和 PCR 擴增,穫得 DNA,純化後,採用覈痠分析儀進行 16S rRNA 序列測定.結果 49 種分枝桿菌模式株中,採用 RP-HPLC 分析時,單簇峰的結覈分枝桿菌、牛分枝桿菌和胃分枝桿菌,雙簇峰的愛知分枝桿菌和囉德島分枝桿菌,三簇峰的南非分枝桿菌和母牛分枝桿菌共 7 種因各組內相對保留時間和相對峰高比值相近而難以進行鑒彆;採用 16S rRNA 序列分析法分析時,產鼻疽分枝桿菌和塞內加爾分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌和海分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌和胃分枝桿菌、龜亞分枝桿菌和龜膿分枝桿菌以及結覈分枝桿菌複閤群(結覈分枝桿菌、牛分枝桿菌、田鼠分枝桿菌和非洲分枝桿菌)共 12 種因各組內基因序列相似性百分比為 100% 而難以進行鑒彆.通過兩種分型鑒彆方法的比較,可見除結覈分枝桿菌和牛分枝桿菌外,兩種分型方法相互補充,可將 49 種分枝桿菌模式株中的 47 種進行明確鑒彆.結論 分枝菌痠 RP-HPLC 和 16S rRNA 序列分析法均為分枝桿菌的分型鑒定提供瞭準確和有效的技術方法.兩種方法相互藉鑒能準確地將大多數分枝桿菌鑒定到種.
목적 비교반상고효액상색보법(RP-HPLC)화 16S rRNA서렬분석법대분지간균분형감별적이동.방법 장<백걸세균감정수책>중재입적 49 충분지간균모식주접충우개량라씨배양기상,치우최괄온도하부육.도취생장량호차무오염적배양물,일부분경조화화산화제취분지균산병연생후,채용반상고효액상색보법진행분지균산지문도보구건;령일부분경렬해화 PCR 확증,획득 DNA,순화후,채용핵산분석의진행 16S rRNA 서렬측정.결과 49 충분지간균모식주중,채용 RP-HPLC 분석시,단족봉적결핵분지간균、우분지간균화위분지간균,쌍족봉적애지분지간균화라덕도분지간균,삼족봉적남비분지간균화모우분지간균공 7 충인각조내상대보류시간화상대봉고비치상근이난이진행감별;채용 16S rRNA 서렬분석법분석시,산비저분지간균화새내가이분지간균、궤양분지간균화해분지간균、감살사분지간균화위분지간균、구아분지간균화구농분지간균이급결핵분지간균복합군(결핵분지간균、우분지간균、전서분지간균화비주분지간균)공 12 충인각조내기인서렬상사성백분비위 100% 이난이진행감별.통과량충분형감별방법적비교,가견제결핵분지간균화우분지간균외,량충분형방법상호보충,가장 49 충분지간균모식주중적 47 충진행명학감별.결론 분지균산 RP-HPLC 화 16S rRNA 서렬분석법균위분지간균적분형감정제공료준학화유효적기술방법.량충방법상호차감능준학지장대다수분지간균감정도충.
