中山大学学报(自然科学版)
中山大學學報(自然科學版)
중산대학학보(자연과학판)
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI
2009年
1期
62-66
,共5页
康海岐%申国安%杨金水%程在全
康海岐%申國安%楊金水%程在全
강해기%신국안%양금수%정재전
杂交籼稻%姊妹染色单体粘着蛋白%OsRad21-i%原核表达%载体构建
雜交秈稻%姊妹染色單體粘著蛋白%OsRad21-i%原覈錶達%載體構建
잡교선도%자매염색단체점착단백%OsRad21-i%원핵표체%재체구건
以杂交水稻汕优63的根组织cDNA为模板,采用引物设计引入酶切位点和RT-PCR方法,扩增出了籼稻姊妹染色单体粘着基因OsRad21-i (AY318757)开放阅读框(ORF),命名为Eqfr,两端分别带有BamHⅠ和SalⅠ限制性位点.然后克隆到pGEM-T载体,将重组克隆载体pGEM-T-Eqfr与表达载体pQE30分别同时进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切,连接酶切后的Eqfr和pQE30,并转化DH5α感受态细胞,获得了DH5α[pQE30-Eqfr]重组克隆.再以其重组质粒转化M15[pREP-4]感受态细胞,筛选出M15[pQE30-Eqfr, pREP-4]重组克隆.通过诱导表达,检测到了相对分子质量约为116 000的重组蛋白表达,在诱导后的1～3 h里表达量较高,之后表达量开始下降.用实验证实了理论推测ORF的正确性,所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的蛋白质实验奠定了基础.
以雜交水稻汕優63的根組織cDNA為模闆,採用引物設計引入酶切位點和RT-PCR方法,擴增齣瞭秈稻姊妹染色單體粘著基因OsRad21-i (AY318757)開放閱讀框(ORF),命名為Eqfr,兩耑分彆帶有BamHⅠ和SalⅠ限製性位點.然後剋隆到pGEM-T載體,將重組剋隆載體pGEM-T-Eqfr與錶達載體pQE30分彆同時進行BamHⅠ和SalⅠ雙酶切,連接酶切後的Eqfr和pQE30,併轉化DH5α感受態細胞,穫得瞭DH5α[pQE30-Eqfr]重組剋隆.再以其重組質粒轉化M15[pREP-4]感受態細胞,篩選齣M15[pQE30-Eqfr, pREP-4]重組剋隆.通過誘導錶達,檢測到瞭相對分子質量約為116 000的重組蛋白錶達,在誘導後的1～3 h裏錶達量較高,之後錶達量開始下降.用實驗證實瞭理論推測ORF的正確性,所穫得的錶達蛋白及其錶達體繫為下一步的蛋白質實驗奠定瞭基礎.
이잡교수도산우63적근조직cDNA위모판,채용인물설계인입매절위점화RT-PCR방법,확증출료선도자매염색단체점착기인OsRad21-i (AY318757)개방열독광(ORF),명명위Eqfr,량단분별대유BamHⅠ화SalⅠ한제성위점.연후극륭도pGEM-T재체,장중조극륭재체pGEM-T-Eqfr여표체재체pQE30분별동시진행BamHⅠ화SalⅠ쌍매절,련접매절후적Eqfr화pQE30,병전화DH5α감수태세포,획득료DH5α[pQE30-Eqfr]중조극륭.재이기중조질립전화M15[pREP-4]감수태세포,사선출M15[pQE30-Eqfr, pREP-4]중조극륭.통과유도표체,검측도료상대분자질량약위116 000적중조단백표체,재유도후적1～3 h리표체량교고,지후표체량개시하강.용실험증실료이론추측ORF적정학성,소획득적표체단백급기표체체계위하일보적단백질실험전정료기출.
