中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2009年
3期
28-30
,共3页
田晓灵%赵永刚%宋厚辉%王志亮%王凤龙
田曉靈%趙永剛%宋厚輝%王誌亮%王鳳龍
전효령%조영강%송후휘%왕지량%왕봉룡
小反刍兽疫%H基因%表达%抗原位点
小反芻獸疫%H基因%錶達%抗原位點
소반추수역%H기인%표체%항원위점
目的 表达小反刍兽疫病毒H蛋白的主要抗原位点用于检测与预防. 方法 用DNAStar分析小反刍兽疫病毒H基因的主要抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的H基因的主要抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经不同浓度的IPTG诱导表达PPRV H基因的主要抗原位点:用SDS-PAGE和Western-blotting分析所有蛋白的表达.结果 将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-H66-249和PET-28b-H281-550酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫H蛋白基因完全一致,其大小分别为569bp和831bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和Western-blotting检测,证明所有的蛋白均得到表达.结论 成功表达了PPRV H基因的主要抗原蛋白,为日后的检测与预防工作奠定了基础.
目的 錶達小反芻獸疫病毒H蛋白的主要抗原位點用于檢測與預防. 方法 用DNAStar分析小反芻獸疫病毒H基因的主要抗原位點,採用逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)技術,從病羊組織中擴增PPRV的H基因的主要抗原位點併剋隆到原覈錶達載體PET-28b中,最後用PCR、酶切和測序分析對重組質粒進行鑒定;將重組質粒轉化到大腸桿菌Rosetta中,經不同濃度的IPTG誘導錶達PPRV H基因的主要抗原位點:用SDS-PAGE和Western-blotting分析所有蛋白的錶達.結果 將RT-PCR產物電泳,得到與預期大小相符的特異性片段;對重組質粒PET-28b-H66-249和PET-28b-H281-550酶切後,均齣現預期相符的片段;DNA測序錶明插入片段的序列與小反芻獸疫H蛋白基因完全一緻,其大小分彆為569bp和831bp;將重組錶達的蛋白經SDS-PAGE和Western-blotting檢測,證明所有的蛋白均得到錶達.結論 成功錶達瞭PPRV H基因的主要抗原蛋白,為日後的檢測與預防工作奠定瞭基礎.
목적 표체소반추수역병독H단백적주요항원위점용우검측여예방. 방법 용DNAStar분석소반추수역병독H기인적주요항원위점,채용역전록취합매련식반응(RT-PCR)기술,종병양조직중확증PPRV적H기인적주요항원위점병극륭도원핵표체재체PET-28b중,최후용PCR、매절화측서분석대중조질립진행감정;장중조질립전화도대장간균Rosetta중,경불동농도적IPTG유도표체PPRV H기인적주요항원위점:용SDS-PAGE화Western-blotting분석소유단백적표체.결과 장RT-PCR산물전영,득도여예기대소상부적특이성편단;대중조질립PET-28b-H66-249화PET-28b-H281-550매절후,균출현예기상부적편단;DNA측서표명삽입편단적서렬여소반추수역H단백기인완전일치,기대소분별위569bp화831bp;장중조표체적단백경SDS-PAGE화Western-blotting검측,증명소유적단백균득도표체.결론 성공표체료PPRV H기인적주요항원단백,위일후적검측여예방공작전정료기출.
