CAJ | 학술논문

目的研究扩增后脐血巨核细胞的生物学特性和功能,为脐血巨核细胞的扩增和临床应用提供依据.方法收集足月妊娠健康新生儿的脐带血,免疫磁珠法分离出其中的CD+34细胞.采用血小板生长因子(thrombopoietin,TPO)+干细胞因子(stem cell factor,SCF)+白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)+IL-6和TPO+SCF两种细胞因子组合,将富集的脐血CD+34接种于无血清无基质细胞的悬浮培养体系中,分别在3、7、10、14 d收集扩增产物.运用流式细胞术检测巨核细胞的表型;血浆块法检测巨核细胞集落(colony forming unit-megakaryocyte,CFU-MK)的形成;对巨核细胞进行DNA含量检测以评价其成熟程度;血小板体外活化实验及SCID小鼠体内移植实验评价扩增后巨核细胞的功能.结果不同细胞因子组合和培养时间扩增后,巨核细胞的数量和生物学特性不同.随着培养时间的延长,巨核细胞(CD+41)的数量逐渐增加,但培养至14 d时增势减缓.因子组合TPO+SCF+IL-3+IL-6各时间段的扩增能力(分别扩增5.2、40.7、121.2、149.7倍)均比因子组合TPO+SCF(分别扩增3.8、27.4、85.9、106.5倍)强,但因子组合TPO+SCF的扩增能力仍能满足临床的需要.巨核祖细胞(CD+34CD+41)的数量在第7天时最多(分别增加43.4和36.2倍),这也被CFUMk所证实.DNA含量检测发现,随着培养天数的增加,多倍体细胞所占的百分比增加.体外血小板活化实验证实,扩增的巨核细胞在体外可产生血小板,有正常巨核细胞功能.移植后两组小鼠的骨髓中均检测到人CD+45和CD+41细胞.小鼠外周血中人血小板在移植后3 d就可测到,5 d就可达到高水平(分别为20.7%和17.9%),维持20 d以后才逐渐下降.结论通过对扩增后巨核细胞的生物学特性的研究,有助于寻找有效、简便、易于植入受者体内的扩增方法.体外扩增的脐血巨核细胞可植入骨髓并产生功能正常的血小板.
목적 연구확증후제혈거핵세포적생물학특성화공능,위제혈거핵세포적확증화림상응용제공의거.방법 수집족월임신건강신생인적제대혈,면역자주법분리출기중적CD+34세포.채용혈소판생장인자(thrombopoietin,TPO)+간세포인자(stem cell factor,SCF)+백세포개소3(interleukin-3,IL-3)+IL-6화TPO+SCF량충세포인자조합,장부집적제혈CD+34접충우무혈청무기질세포적현부배양체계중,분별재3、7、10、14 d수집확증산물.운용류식세포술검측거핵세포적표형;혈장괴법검측거핵세포집락(colony forming unit-megakaryocyte,CFU-MK)적형성;대거핵세포진행DNA함량검측이평개기성숙정도;혈소판체외활화실험급SCID소서체내이식실험평개확증후거핵세포적공능.결과 불동세포인자조합화배양시간확증후,거핵세포적수량화생물학특성불동.수착배양시간적연장,거핵세포(CD+41)적수량축점증가,단배양지14 d시증세감완.인자조합TPO+SCF+IL-3+IL-6각시간단적확증능력(분별확증5.2、40.7、121.2、149.7배)균비인자조합TPO+SCF(분별확증3.8、27.4、85.9、106.5배)강,단인자조합TPO+SCF적확증능력잉능만족림상적수요.거핵조세포(CD+34CD+41)적수량재제7천시최다(분별증가43.4화36.2배),저야피CFUMk소증실.DNA함량검측발현,수착배양천수적증가,다배체세포소점적백분비증가.체외혈소판활화실험증실,확증적거핵세포재체외가산생혈소판,유정상거핵세포공능.이식후량조소서적골수중균검측도인CD+45화CD+41세포.소서외주혈중인혈소판재이식후3 d취가측도,5 d취가체도고수평(분별위20.7%화17.9%),유지20 d이후재축점하강.결론 통과대확증후거핵세포적생물학특성적연구,유조우심조유효、간편、역우식입수자체내적확증방법.체외확증적제혈거핵세포가식입골수병산생공능정상적혈소판.