CAJ | 학술논문

[目的]为进一步研究新城疫病毒的分子结构和基因疫苗奠定基础.[方法]用自行设计的l对引物,通过RT-PCR从接毒的SPF鸡胚的尿囊液中克隆了新城疫病毒F基因部分片段,将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了重组质粒,对提取的融合蛋白进行亲和层析纯化和琼扩、ELISA及Western-blot检测. [结果]通过克隆和PCR扩增获得新城疫病毒F基因的部分片段,大小为509 bp;对构建的重组质粒pGEX-4T-1-F509经诱导表达,获得分子大小约为44 000 bp 的融合蛋白,其中F基因的部分片段大小约18 000 bp;经亲和层析,获得纯化GST-F509融合蛋白,进一步用该蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡新城疫病毒F蛋白抗体.[结论]琼脂扩散试验、ELISA及Western-blot检测表明,该融合蛋白中的F片段具有良好的抗原性.
[목적]위진일보연구신성역병독적분자결구화기인역묘전정기출.[방법]용자행설계적l대인물,통과RT-PCR종접독적SPF계배적뇨낭액중극륭료신성역병독F기인부분편단,장해기인편단삽입함곡광감태(GST)기인적질립pGEX-4T-1,구건료중조질립,대제취적융합단백진행친화층석순화화경확、ELISA급Western-blot검측. [결과]통과극륭화PCR확증획득신성역병독F기인적부분편단,대소위509 bp;대구건적중조질립pGEX-4T-1-F509경유도표체,획득분자대소약위44 000 bp 적융합단백,기중F기인적부분편단대소약18 000 bp;경친화층석,획득순화GST-F509융합단백,진일보용해단백면역소서,제비료서원항계신성역병독F단백항체.[결론]경지확산시험、ELISA급Western-blot검측표명,해융합단백중적F편단구유량호적항원성.