中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2008年
2期
65-69
,共5页
徐金华%许炎%郑志忠%夏天%王健%梁俊%张臻%朱小华%朱乃硕
徐金華%許炎%鄭誌忠%夏天%王健%樑俊%張臻%硃小華%硃迺碩
서금화%허염%정지충%하천%왕건%량준%장진%주소화%주내석
疱疹病毒2型,人%疫苗,DNA%糖蛋白类%感染细胞蛋白27
皰疹病毒2型,人%疫苗,DNA%糖蛋白類%感染細胞蛋白27
포진병독2형,인%역묘,DNA%당단백류%감염세포단백27
目的 构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗,探讨其诱导机体免疫应答的能力.方法 将HSV-2野生株经PCR鉴定后,利用PCR技术从其基因组扩增出HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282和gD1-77等6个基因片段.采用多基冈片段一步酶切连接法获得构建的6个片段的复合DNA疫苗(HV)融合基冈片段,经pGEMT载体克隆后,定向插入真核表达质粒pcDNA3.1载体中,构建重组真核表达质粒HV-pcDNA3.1,并对其进行酶切分析及测序鉴定.10只C57/BL6小鼠均分为脂质体包裹pcDNA3.1空载体质粒对照组和脂质体包裹HV-pcDNA3.1质粒免疫组.ELISA检测小鼠血清HSV-2特异性IgG、IL-2和IFN-γ,乳酸脱氢酶法检测CTL功能.数据行t检验.结果 酶切重组质粒HV-pcDNA3.1,电泳可见两条带,分别为融合基因HV(1.3 kb)和线性质粒pcDNA3.1(5.4 kb).测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与基因库HSV-2相关序列同源性达99.9%.与pcDNA3.1空载体质粒组相比,HV-pcDNA3.1免疫组小鼠血清中HSV-2特异性IgG(0.29±0.14比0.11±0.04,P＜0.05)、IL-2(1 246.8±157.0比685.2±104.2,P＜0.05)和IFN-γ(1 340.3±108.5比547.7±189.3,P＜0.05)表达明显增加,CTL活性增强(31.82±10.12比8.30±2.91,P＜0.05).结论 成功构建了HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗,能有效引起小鼠机体特异性体液免疫和细胞免疫应答.
目的 構建單純皰疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD、gB、gC和早期錶達蛋白ICP27的多錶位複閤DNA疫苗,探討其誘導機體免疫應答的能力.方法 將HSV-2野生株經PCR鑒定後,利用PCR技術從其基因組擴增齣HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282和gD1-77等6箇基因片段.採用多基岡片段一步酶切連接法穫得構建的6箇片段的複閤DNA疫苗(HV)融閤基岡片段,經pGEMT載體剋隆後,定嚮插入真覈錶達質粒pcDNA3.1載體中,構建重組真覈錶達質粒HV-pcDNA3.1,併對其進行酶切分析及測序鑒定.10隻C57/BL6小鼠均分為脂質體包裹pcDNA3.1空載體質粒對照組和脂質體包裹HV-pcDNA3.1質粒免疫組.ELISA檢測小鼠血清HSV-2特異性IgG、IL-2和IFN-γ,乳痠脫氫酶法檢測CTL功能.數據行t檢驗.結果 酶切重組質粒HV-pcDNA3.1,電泳可見兩條帶,分彆為融閤基因HV(1.3 kb)和線性質粒pcDNA3.1(5.4 kb).測序結果錶明,剋隆基因插入方嚮正確,與基因庫HSV-2相關序列同源性達99.9%.與pcDNA3.1空載體質粒組相比,HV-pcDNA3.1免疫組小鼠血清中HSV-2特異性IgG(0.29±0.14比0.11±0.04,P＜0.05)、IL-2(1 246.8±157.0比685.2±104.2,P＜0.05)和IFN-γ(1 340.3±108.5比547.7±189.3,P＜0.05)錶達明顯增加,CTL活性增彊(31.82±10.12比8.30±2.91,P＜0.05).結論 成功構建瞭HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期錶達蛋白ICP27的多錶位複閤DNA疫苗,能有效引起小鼠機體特異性體液免疫和細胞免疫應答.
목적 구건단순포진병독2형(HSV-2)당단백gD、gB、gC화조기표체단백ICP27적다표위복합DNA역묘,탐토기유도궤체면역응답적능력.방법 장HSV-2야생주경PCR감정후,이용PCR기술종기기인조확증출HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282화gD1-77등6개기인편단.채용다기강편단일보매절련접법획득구건적6개편단적복합DNA역묘(HV)융합기강편단,경pGEMT재체극륭후,정향삽입진핵표체질립pcDNA3.1재체중,구건중조진핵표체질립HV-pcDNA3.1,병대기진행매절분석급측서감정.10지C57/BL6소서균분위지질체포과pcDNA3.1공재체질립대조조화지질체포과HV-pcDNA3.1질립면역조.ELISA검측소서혈청HSV-2특이성IgG、IL-2화IFN-γ,유산탈경매법검측CTL공능.수거행t검험.결과 매절중조질립HV-pcDNA3.1,전영가견량조대,분별위융합기인HV(1.3 kb)화선성질립pcDNA3.1(5.4 kb).측서결과표명,극륭기인삽입방향정학,여기인고HSV-2상관서렬동원성체99.9%.여pcDNA3.1공재체질립조상비,HV-pcDNA3.1면역조소서혈청중HSV-2특이성IgG(0.29±0.14비0.11±0.04,P＜0.05)、IL-2(1 246.8±157.0비685.2±104.2,P＜0.05)화IFN-γ(1 340.3±108.5비547.7±189.3,P＜0.05)표체명현증가,CTL활성증강(31.82±10.12비8.30±2.91,P＜0.05).결론 성공구건료HSV-2당단백gD、gB、gC화조기표체단백ICP27적다표위복합DNA역묘,능유효인기소서궤체특이성체액면역화세포면역응답.
