汕头大学医学院学报
汕頭大學醫學院學報
산두대학의학원학보
JOURNAL OF SHANTOU UNIVERSITY MEDICAL COLLEGE
2008年
1期
15-19
,共5页
肖李锋%刘戈飞%宋旭红%谢健平%张巧霞%李蕊%黄东阳
肖李鋒%劉戈飛%宋旭紅%謝健平%張巧霞%李蕊%黃東暘
초리봉%류과비%송욱홍%사건평%장교하%리예%황동양
兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶%维生素K3%维生素K4%高效液相色谱
兔輔酶Ⅱ依賴性視黃醛還原酶%維生素K3%維生素K4%高效液相色譜
토보매Ⅱ의뢰성시황철환원매%유생소K3%유생소K4%고효액상색보
目的:检测兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶(NDRR)对维生素K3的催化活性并对该酶还原K3所生成的产物进行鉴定.方法:构建含6×His标签的兔NDRR的表达菌株,诱导表达并超声裂解后,通过Ni2+亲和层析纯化得到重组兔NDRR.在相对去氧隔绝空气反应体系以及存在高浓度十二烷基磺酸钠的反应条件下,利用高效液相色谱(HPLC)对兔NDRR还原K3的催化活性进行酶动力学研究.利用化学合成,HPLC及荧光光谱扫描对其还原产物进行鉴定.结果:诱导表达后的细菌裂解上清液经一步亲和层析后得到单一酶蛋白,其对K3的比活性分别是原空白菌裂解上清液和经诱导表达后的菌裂解上清液的比活性的18.6和7.3倍.经过HPLC测定,兔NDRR对K3的Km值为30.7,Vmax 0.046μmoL/(min·mg).利用四氢硼酸钠与K3化学合成的产物进行HPLC分析,其保留时间与酶反应所产生的产物峰保留时间一致,而且反应后短时间内能利用荧光光谱扫描得到K4相应的光谱图.结论:兔NDRR对K3存在还原活性,并生成K4.
目的:檢測兔輔酶Ⅱ依賴性視黃醛還原酶(NDRR)對維生素K3的催化活性併對該酶還原K3所生成的產物進行鑒定.方法:構建含6×His標籤的兔NDRR的錶達菌株,誘導錶達併超聲裂解後,通過Ni2+親和層析純化得到重組兔NDRR.在相對去氧隔絕空氣反應體繫以及存在高濃度十二烷基磺痠鈉的反應條件下,利用高效液相色譜(HPLC)對兔NDRR還原K3的催化活性進行酶動力學研究.利用化學閤成,HPLC及熒光光譜掃描對其還原產物進行鑒定.結果:誘導錶達後的細菌裂解上清液經一步親和層析後得到單一酶蛋白,其對K3的比活性分彆是原空白菌裂解上清液和經誘導錶達後的菌裂解上清液的比活性的18.6和7.3倍.經過HPLC測定,兔NDRR對K3的Km值為30.7,Vmax 0.046μmoL/(min·mg).利用四氫硼痠鈉與K3化學閤成的產物進行HPLC分析,其保留時間與酶反應所產生的產物峰保留時間一緻,而且反應後短時間內能利用熒光光譜掃描得到K4相應的光譜圖.結論:兔NDRR對K3存在還原活性,併生成K4.
목적:검측토보매Ⅱ의뢰성시황철환원매(NDRR)대유생소K3적최화활성병대해매환원K3소생성적산물진행감정.방법:구건함6×His표첨적토NDRR적표체균주,유도표체병초성렬해후,통과Ni2+친화층석순화득도중조토NDRR.재상대거양격절공기반응체계이급존재고농도십이완기광산납적반응조건하,이용고효액상색보(HPLC)대토NDRR환원K3적최화활성진행매동역학연구.이용화학합성,HPLC급형광광보소묘대기환원산물진행감정.결과:유도표체후적세균렬해상청액경일보친화층석후득도단일매단백,기대K3적비활성분별시원공백균렬해상청액화경유도표체후적균렬해상청액적비활성적18.6화7.3배.경과HPLC측정,토NDRR대K3적Km치위30.7,Vmax 0.046μmoL/(min·mg).이용사경붕산납여K3화학합성적산물진행HPLC분석,기보류시간여매반응소산생적산물봉보류시간일치,이차반응후단시간내능이용형광광보소묘득도K4상응적광보도.결론:토NDRR대K3존재환원활성,병생성K4.
