中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
2期
90-92,98
,共4页
马爱霞%袁洁%丁壮%宣华%宋子运%徐明
馬愛霞%袁潔%丁壯%宣華%宋子運%徐明
마애하%원길%정장%선화%송자운%서명
鹅源副粘病毒%NA-1株%M基因%F基因%HN基因%真核表达
鵝源副粘病毒%NA-1株%M基因%F基因%HN基因%真覈錶達
아원부점병독%NA-1주%M기인%F기인%HN기인%진핵표체
目的 获得鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株M、F和HN基因真核表达蛋白.方法 将NA-1株GPMV经SPF鸡胚增殖、纯化,提取病毒基因组RNA.参考GenBank登录的NA-1株GPMV基因组序列,设计3对特异性引物,利用RT-PCR法,分别扩增M、F和HN基因开放阅读框(ORF),将目的基因克隆至pMD18-T-Simple载体,并进行酶切和序列测定.将目的 片段克隆至pCI-neo表达载体,酶切鉴定正确的重组质粒,分别命名为pCI-M、pCI-F和pCI-HN.将重组表达质粒分别转染Vero细胞,用间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达.结果 RT-PCR法分别扩增出M、F和HN基因,大小与预期一致.克隆载体及表达载体酶切及测序鉴定正确;重组真核表达质粒转染Vero细胞后,荧光显微镜下可见特异性荧光.结论 利用pCI-neo真核表达载体在Vero细胞中成功表达了NA-1株 GPMV M、F和HN基因,为下一步研究该病毒的出芽机制以及各结构蛋白的功能奠定了基础.
目的 穫得鵝源副粘病毒(GPMV)NA-1株M、F和HN基因真覈錶達蛋白.方法 將NA-1株GPMV經SPF鷄胚增殖、純化,提取病毒基因組RNA.參攷GenBank登錄的NA-1株GPMV基因組序列,設計3對特異性引物,利用RT-PCR法,分彆擴增M、F和HN基因開放閱讀框(ORF),將目的基因剋隆至pMD18-T-Simple載體,併進行酶切和序列測定.將目的 片段剋隆至pCI-neo錶達載體,酶切鑒定正確的重組質粒,分彆命名為pCI-M、pCI-F和pCI-HN.將重組錶達質粒分彆轉染Vero細胞,用間接免疫熒光試驗鑒定目的蛋白的錶達.結果 RT-PCR法分彆擴增齣M、F和HN基因,大小與預期一緻.剋隆載體及錶達載體酶切及測序鑒定正確;重組真覈錶達質粒轉染Vero細胞後,熒光顯微鏡下可見特異性熒光.結論 利用pCI-neo真覈錶達載體在Vero細胞中成功錶達瞭NA-1株 GPMV M、F和HN基因,為下一步研究該病毒的齣芽機製以及各結構蛋白的功能奠定瞭基礎.
목적 획득아원부점병독(GPMV)NA-1주M、F화HN기인진핵표체단백.방법 장NA-1주GPMV경SPF계배증식、순화,제취병독기인조RNA.삼고GenBank등록적NA-1주GPMV기인조서렬,설계3대특이성인물,이용RT-PCR법,분별확증M、F화HN기인개방열독광(ORF),장목적기인극륭지pMD18-T-Simple재체,병진행매절화서렬측정.장목적 편단극륭지pCI-neo표체재체,매절감정정학적중조질립,분별명명위pCI-M、pCI-F화pCI-HN.장중조표체질립분별전염Vero세포,용간접면역형광시험감정목적단백적표체.결과 RT-PCR법분별확증출M、F화HN기인,대소여예기일치.극륭재체급표체재체매절급측서감정정학;중조진핵표체질립전염Vero세포후,형광현미경하가견특이성형광.결론 이용pCI-neo진핵표체재체재Vero세포중성공표체료NA-1주 GPMV M、F화HN기인,위하일보연구해병독적출아궤제이급각결구단백적공능전정료기출.
