CAJ | 학술논문

目的:本研究拟用肝细胞生长因子(HGF)基因修饰内皮祖细胞(EPCs),以观察其对EPCs增殖、迁移、分泌一氧化氮(NO)及生血管能力的影响.方法:采用梯度离心法分离并培养大鼠骨髓EPCs,荧光DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取和异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-Ⅰ)结合荧光双染法鉴定大鼠EPCs.细胞分为HGF转染组、阴性对照组及空白对照组,HGF组用脂质体介导法导入pIRES2-EGFP-HGF质粒,阴性对照组导入pIRES2-EGFP质粒,空白对照组不导入质粒,然后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的合成及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测细胞HGF mRNA的表达来鉴定转染的EPCs.用四唑盐(MTT)法、改良的Bodyen小室及硝酸盐还原法观察细胞增殖、移行及分泌NO能力;体外成管试验用于分析细胞生血管的能力.结果:原代细胞培养4天后发现可成梭形贴壁细胞,7天后细胞成集落状,原代细胞培养21天左右接近融合并呈典型的鹅卵石样排列,细胞DiI-LDL摄取试验阳性,FITC-UEA-Ⅰ染色阳性.转染18h后HGF转染组及阴性对照组细胞绿色荧光蛋白检测呈阳性,转染率为40%,而空白组则呈阴性.RT-PCR结果显示,HGF转染组细胞内mRNA的表达显著高于对照组,而空白对照及阴性对照组HGF mRNA表达无显著性差异.HGF转染组细胞增殖、移行能力及分泌NO量均显著高于对照组.在ECMatrix培养基上培养12h,HGF转染组体外成管评分显著高于对照组.结论:HGF基因修饰能够显著提高EPCs增殖、移行、分泌NO及生血管能力,改善EPCs的生物学功能.
목적:본연구의용간세포생장인자(HGF)기인수식내피조세포(EPCs),이관찰기대EPCs증식、천이、분비일양화담(NO)급생혈관능력적영향.방법:채용제도리심법분리병배양대서골수EPCs,형광DiI표기을선화저밀도지단백(DiI-acLDL)섭취화이류청산형광소표기적형두응집소(FITC-UEA-Ⅰ)결합형광쌍염법감정대서EPCs.세포분위HGF전염조、음성대조조급공백대조조,HGF조용지질체개도법도입pIRES2-EGFP-HGF질립,음성대조조도입pIRES2-EGFP질립,공백대조조불도입질립,연후용형광현미경관찰록색형광단백적합성급역전록다취매련반응(RT-PCR)검측세포HGF mRNA적표체래감정전염적EPCs.용사서염(MTT)법、개량적Bodyen소실급초산염환원법관찰세포증식、이행급분비NO능력;체외성관시험용우분석세포생혈관적능력.결과:원대세포배양4천후발현가성사형첩벽세포,7천후세포성집락상,원대세포배양21천좌우접근융합병정전형적아란석양배렬,세포DiI-LDL섭취시험양성,FITC-UEA-Ⅰ염색양성.전염18h후HGF전염조급음성대조조세포록색형광단백검측정양성,전염솔위40%,이공백조칙정음성.RT-PCR결과현시,HGF전염조세포내mRNA적표체현저고우대조조,이공백대조급음성대조조HGF mRNA표체무현저성차이.HGF전염조세포증식、이행능력급분비NO량균현저고우대조조.재ECMatrix배양기상배양12h,HGF전염조체외성관평분현저고우대조조.결론:HGF기인수식능구현저제고EPCs증식、이행、분비NO급생혈관능력,개선EPCs적생물학공능.