CAJ | 학술논문

目的研究湖北钉螺肝脏细胞的原代培养方法,观察肝脏细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性分布.方法解剖湖北钉螺取肝脏,用0.2%(体积比)苯扎溴铵(新洁尔灭)浸泡及含抗生素的生理盐水无菌洗涤、磨碎、过滤,收集肝脏细胞.采用联合法和静置悬浮法接种培养.细胞培养液配方:50 ml M199溶液、3 mg/ml水解乳蛋白溶液30ml(平衡盐溶液配制)及胎牛血清20ml,混匀,附加常量抗生素(青霉素100 IU/ml、链霉素100 μg/ml、卡那霉素50μg/ml),混匀,调节pH值为7.2～7.4.于26.5℃培养.联合法培养的肝脏细胞分别进行Giemsa、SDH和LDH染色,显微镜观察活细胞与染色细胞形态、SDH和LDH的分布,以及观察静置悬浮法培养的肝脏细胞形态.结果联合法培养的肝脏细胞贴壁后形态各异,以圆形、椭圆形为主,也有三角形和不规则形等.细胞大小约(4～16) μm×(6～20) μm.较小细胞形成细胞簇,细胞核不明显,细胞质丰富、透亮.散在分布的单个细胞稍大,细胞核较大而明显,细胞质较少.培养5～7 d的肝脏细胞逐渐退化.Giemsa染色将细胞分为两种,一种为细胞质呈蓝色,细胞核紫红色;另一种是细胞质呈紫红色,细胞核呈蓝色.SDH和LDH染色,细胞质出现大小不同、深浅不一的蓝色颗粒.静置悬浮法培养的肝脏细胞不易贴壁,多为圆形,细胞核不明显.细胞较小,约为(4～6)μm×(6～8)μm.培养3 d均被细菌污染.结论联合法更适合湖北钉螺肝脏细胞原代培养,SDH和LDH活性位于肝脏细胞质中.
목적 연구호북정라간장세포적원대배양방법,관찰간장세포호박산탈경매(SDH)화유산탈경매(LDH)적활성분포.방법 해부호북정라취간장,용0.2%(체적비)분찰추안(신길이멸)침포급함항생소적생리염수무균세조、마쇄、과려,수집간장세포.채용연합법화정치현부법접충배양.세포배양액배방:50 ml M199용액、3 mg/ml수해유단백용액30ml(평형염용액배제)급태우혈청20ml,혼균,부가상량항생소(청매소100 IU/ml、련매소100 μg/ml、잡나매소50μg/ml),혼균,조절pH치위7.2～7.4.우26.5℃배양.연합법배양적간장세포분별진행Giemsa、SDH화LDH염색,현미경관찰활세포여염색세포형태、SDH화LDH적분포,이급관찰정치현부법배양적간장세포형태.결과 연합법배양적간장세포첩벽후형태각이,이원형、타원형위주,야유삼각형화불규칙형등.세포대소약(4～16) μm×(6～20) μm.교소세포형성세포족,세포핵불명현,세포질봉부、투량.산재분포적단개세포초대,세포핵교대이명현,세포질교소.배양5～7 d적간장세포축점퇴화.Giemsa염색장세포분위량충,일충위세포질정람색,세포핵자홍색;령일충시세포질정자홍색,세포핵정람색.SDH화LDH염색,세포질출현대소불동、심천불일적람색과립.정치현부법배양적간장세포불역첩벽,다위원형,세포핵불명현.세포교소,약위(4～6)μm×(6～8)μm.배양3 d균피세균오염.결론 연합법경괄합호북정라간장세포원대배양,SDH화LDH활성위우간장세포질중.