华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2007年
6期
865-870
,共6页
彭丽桃%李琼%刘合生%陈佩%丰明乾%潘思轶
彭麗桃%李瓊%劉閤生%陳珮%豐明乾%潘思軼
팽려도%리경%류합생%진패%봉명건%반사질
植物硫化激动素%表达条件%融合蛋白%纯化
植物硫化激動素%錶達條件%融閤蛋白%純化
식물류화격동소%표체조건%융합단백%순화
植物硫化激动素(Phytosulfokine-α,PSK-α)是植物体内一种小分子肽类生长调节因子,具有促进细胞增殖等多种生物活性.但由于其在植物体内的含量极低,难以满足PSK-α研究和应用的需要.笔者在前期构建PSK-α原核型表达载体的基础上,研究了影响融合蛋白表达的因素,优化了培养条件,并运用谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)亲和柱层析对融合蛋白进行了分离纯化.通过单因素和正交试验的结果表明:培养温度、诱导剂浓度、诱导剂加入时机和诱导时间均对融合蛋白的表达量和表达形式有很大影响;在诱导温度20℃,扩大培养150 min(菌液培养至OD600值约0.8止)后加入诱导剂1.0 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG),诱导培养时间8 h条件下,可以获得最多的可溶性融合蛋白GST-PSK-α表达量.
植物硫化激動素(Phytosulfokine-α,PSK-α)是植物體內一種小分子肽類生長調節因子,具有促進細胞增殖等多種生物活性.但由于其在植物體內的含量極低,難以滿足PSK-α研究和應用的需要.筆者在前期構建PSK-α原覈型錶達載體的基礎上,研究瞭影響融閤蛋白錶達的因素,優化瞭培養條件,併運用穀胱甘肽S-轉移酶(glutathione S-transferase,GST)親和柱層析對融閤蛋白進行瞭分離純化.通過單因素和正交試驗的結果錶明:培養溫度、誘導劑濃度、誘導劑加入時機和誘導時間均對融閤蛋白的錶達量和錶達形式有很大影響;在誘導溫度20℃,擴大培養150 min(菌液培養至OD600值約0.8止)後加入誘導劑1.0 mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG),誘導培養時間8 h條件下,可以穫得最多的可溶性融閤蛋白GST-PSK-α錶達量.
식물류화격동소(Phytosulfokine-α,PSK-α)시식물체내일충소분자태류생장조절인자,구유촉진세포증식등다충생물활성.단유우기재식물체내적함량겁저,난이만족PSK-α연구화응용적수요.필자재전기구건PSK-α원핵형표체재체적기출상,연구료영향융합단백표체적인소,우화료배양조건,병운용곡광감태S-전이매(glutathione S-transferase,GST)친화주층석대융합단백진행료분리순화.통과단인소화정교시험적결과표명:배양온도、유도제농도、유도제가입시궤화유도시간균대융합단백적표체량화표체형식유흔대영향;재유도온도20℃,확대배양150 min(균액배양지OD600치약0.8지)후가입유도제1.0 mmol/L이병기-β-D-류대반유당감(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG),유도배양시간8 h조건하,가이획득최다적가용성융합단백GST-PSK-α표체량.
