临床检验杂志
臨床檢驗雜誌
림상검험잡지
2007年
6期
438-440
,共3页
季红峰%潘秀珍%郑峰%王长军%朱进%唐家琪
季紅峰%潘秀珍%鄭峰%王長軍%硃進%唐傢琪
계홍봉%반수진%정봉%왕장군%주진%당가기
猪链球菌%dppⅣ%克隆%酶活性
豬鏈毬菌%dppⅣ%剋隆%酶活性
저련구균%dppⅣ%극륭%매활성
目的 克隆表达猪链球菌2型二肽酶Ⅳ(DPPⅣ)编码基因,分析表达产物的免疫原性,并测定其酶活性.方法 采用PCR法,从四川资阳中毒性休克综合征病人分离株05ZYH33基因组扩增DPPⅣ的编码基因dppⅣ,构建重组表达质粒pET32a-dppⅣ,转化E. coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE鉴定,并用western blot检测其抗原活性;最后对表达产物进行亲和层析纯化,测定其在不同pH、温度下的酶活性.结果 dppⅣ基因在原核细胞中得到高效表达,在最适温度和pH下具有最强酶活性.结论 我国猪链球菌2型毒力株 05ZYH33含有dppⅣ基因,在原核系统高效表达的重组蛋白具有良好的免疫原性和酶活性.
目的 剋隆錶達豬鏈毬菌2型二肽酶Ⅳ(DPPⅣ)編碼基因,分析錶達產物的免疫原性,併測定其酶活性.方法 採用PCR法,從四川資暘中毒性休剋綜閤徵病人分離株05ZYH33基因組擴增DPPⅣ的編碼基因dppⅣ,構建重組錶達質粒pET32a-dppⅣ,轉化E. coli BL21(DE3),篩選暘性轉化子進行IPTG誘導錶達,產物通過SDS-PAGE鑒定,併用western blot檢測其抗原活性;最後對錶達產物進行親和層析純化,測定其在不同pH、溫度下的酶活性.結果 dppⅣ基因在原覈細胞中得到高效錶達,在最適溫度和pH下具有最彊酶活性.結論 我國豬鏈毬菌2型毒力株 05ZYH33含有dppⅣ基因,在原覈繫統高效錶達的重組蛋白具有良好的免疫原性和酶活性.
목적 극륭표체저련구균2형이태매Ⅳ(DPPⅣ)편마기인,분석표체산물적면역원성,병측정기매활성.방법 채용PCR법,종사천자양중독성휴극종합정병인분리주05ZYH33기인조확증DPPⅣ적편마기인dppⅣ,구건중조표체질립pET32a-dppⅣ,전화E. coli BL21(DE3),사선양성전화자진행IPTG유도표체,산물통과SDS-PAGE감정,병용western blot검측기항원활성;최후대표체산물진행친화층석순화,측정기재불동pH、온도하적매활성.결과 dppⅣ기인재원핵세포중득도고효표체,재최괄온도화pH하구유최강매활성.결론 아국저련구균2형독력주 05ZYH33함유dppⅣ기인,재원핵계통고효표체적중조단백구유량호적면역원성화매활성.
