CAJ | 학술논문

目的:目前有关骨髓间充质干细胞向内皮细胞诱导分化的研究较少.本实验分离和培养人骨髓间充质干细胞,用带有VEGF165的质粒转染人骨髓间充质干细胞,探讨血管内皮生长因子对其体外诱导分化的作用.方法:实验于2005～04/2006-04在吉林大学人兽共患病教育部重点实验室完成.取成人的已排除血液系统肿瘤疾病的新鲜骨髓(自愿提供),采用Percoll梯度分离培养骨髓间充质干细胞,于倒置显微镜下观察细胞形态变化和生长情况.原代细胞培养至增殖接近融合状态时,单克隆培养法分离传代培养,扩增骨髓间充质干细胞.采用流式细胞术检测细胞免疫学表型.在原核细胞大肠杆菌DH5α中复制扩增和提取,纯化、克隆pcDNA3.0-VEGF165质粒.用脂质体转染法转染骨髓间充质干细胞.应用流式细胞术检测诱导后骨髓间充质干细胞免疫学表型变化.并采用免疫荧光染色鉴定转染情况,并设质粒空载和未转染的骨髓间充质干细胞为对照.结果:人骨髓间充质干细胞原代培养1周后,造血细胞消失,贴壁细胞体积增大,呈现梭形外观,有粗大的细胞突起伸出.2周后细胞融合成单层,梭形突起变长,排列有明显的方向性,细胞排列成旋涡状、网状、辐射状.流式细胞术显示,人骨髓间充质干细胞免疫学表型CD44、CD29阳性,CD34、CD31、CD45阴性.VEGF165诱导骨髓间充质干细胞后CD44表达明显降低,CD31明显升高.免疫荧光染色显示,用FITC标记后的VEGF抗体使细胞显现绿色荧光,用cy3标记的CD31抗体使细胞显现了红色荧光.结论:转染后的骨髓间充质干细胞细胞表型发生明显转变,CD31表达率明显增高,呈现典型的内皮细胞的表型特征,这说明骨髓间充质干细胞具有向内皮细胞分化的潜能.
목적:목전유관골수간충질간세포향내피세포유도분화적연구교소.본실험분리화배양인골수간충질간세포,용대유VEGF165적질립전염인골수간충질간세포,탐토혈관내피생장인자대기체외유도분화적작용.방법:실험우2005～04/2006-04재길림대학인수공환병교육부중점실험실완성.취성인적이배제혈액계통종류질병적신선골수(자원제공),채용Percoll제도분리배양골수간충질간세포,우도치현미경하관찰세포형태변화화생장정황.원대세포배양지증식접근융합상태시,단극륭배양법분리전대배양,확증골수간충질간세포.채용류식세포술검측세포면역학표형.재원핵세포대장간균DH5α중복제확증화제취,순화、극륭pcDNA3.0-VEGF165질립.용지질체전염법전염골수간충질간세포.응용류식세포술검측유도후골수간충질간세포면역학표형변화.병채용면역형광염색감정전염정황,병설질립공재화미전염적골수간충질간세포위대조.결과:인골수간충질간세포원대배양1주후,조혈세포소실,첩벽세포체적증대,정현사형외관,유조대적세포돌기신출.2주후세포융합성단층,사형돌기변장,배렬유명현적방향성,세포배렬성선와상、망상、복사상.류식세포술현시,인골수간충질간세포면역학표형CD44、CD29양성,CD34、CD31、CD45음성.VEGF165유도골수간충질간세포후CD44표체명현강저,CD31명현승고.면역형광염색현시,용FITC표기후적VEGF항체사세포현현록색형광,용cy3표기적CD31항체사세포현현료홍색형광.결론:전염후적골수간충질간세포세포표형발생명현전변,CD31표체솔명현증고,정현전형적내피세포적표형특정,저설명골수간충질간세포구유향내피세포분화적잠능.