实用医药杂志
實用醫藥雜誌
실용의약잡지
Practical Journal of Medicine & Pharmacy
2007年
11期
1340-1343
,共4页
王广兰%张长远%戴启宇%沈利群%鲍乐乐%高天蓝星%李漩%刘力源
王廣蘭%張長遠%戴啟宇%瀋利群%鮑樂樂%高天藍星%李漩%劉力源
왕엄란%장장원%대계우%침리군%포악악%고천람성%리선%류력원
毕赤酵母细胞%酵母载体%可溶性补体1型受体%蛋白表达%鉴定
畢赤酵母細胞%酵母載體%可溶性補體1型受體%蛋白錶達%鑒定
필적효모세포%효모재체%가용성보체1형수체%단백표체%감정
目的 在酵母细胞SMD1168中表达人可溶性补体1型受体(sCR1),并对其重组蛋白进行纯化以探讨较为接近人体天然蛋白的表达方式,从而为临床诊断及治疗提供方便.方法 从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆人真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pP1C9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+--NTA agarose亲和层析纯化.结果 经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48-72hsCR1融合蛋白表达量最高.此蛋白在凝胶上表现为大于31kD的蛋白区带,在Western blot实验中可被sCR1的CD35单克隆抗体识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白.结论 人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性.
目的 在酵母細胞SMD1168中錶達人可溶性補體1型受體(sCR1),併對其重組蛋白進行純化以探討較為接近人體天然蛋白的錶達方式,從而為臨床診斷及治療提供方便.方法 從人外週血中提取總RNA,應用RT-PCR穫得人sCR1全長cDNA,將其剋隆人真覈錶達載體pPIC9K,構建含人sCR1的重組質粒(pP1C9K-sCR1);經測序鑒定正確後,將重組質粒轉化入畢赤酵母菌細胞SMD1168中,經甲醇誘導,錶達產物經SDS-PAGE分析及Western blot鑒定,併通過Ni2+--NTA agarose親和層析純化.結果 經甲醇誘導的含pPIC9K-sCR1的酵母細胞錶達齣重組人sCR1的融閤蛋白,48-72hsCR1融閤蛋白錶達量最高.此蛋白在凝膠上錶現為大于31kD的蛋白區帶,在Western blot實驗中可被sCR1的CD35單剋隆抗體識彆.經Ni2+-NTA agarose親和層析純化後得到較純的sCR1融閤蛋白.結論 人sCR1融閤蛋白在酵母細胞錶達繫統中的高水平錶達,併且有與人體天然蛋白相同的抗原活性.
목적 재효모세포SMD1168중표체인가용성보체1형수체(sCR1),병대기중조단백진행순화이탐토교위접근인체천연단백적표체방식,종이위림상진단급치료제공방편.방법 종인외주혈중제취총RNA,응용RT-PCR획득인sCR1전장cDNA,장기극륭인진핵표체재체pPIC9K,구건함인sCR1적중조질립(pP1C9K-sCR1);경측서감정정학후,장중조질립전화입필적효모균세포SMD1168중,경갑순유도,표체산물경SDS-PAGE분석급Western blot감정,병통과Ni2+--NTA agarose친화층석순화.결과 경갑순유도적함pPIC9K-sCR1적효모세포표체출중조인sCR1적융합단백,48-72hsCR1융합단백표체량최고.차단백재응효상표현위대우31kD적단백구대,재Western blot실험중가피sCR1적CD35단극륭항체식별.경Ni2+-NTA agarose친화층석순화후득도교순적sCR1융합단백.결론 인sCR1융합단백재효모세포표체계통중적고수평표체,병차유여인체천연단백상동적항원활성.
