细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
12期
1102-1105
,共4页
侯振%周静%高李英%胡艳秋%刘嘉茵
侯振%週靜%高李英%鬍豔鞦%劉嘉茵
후진%주정%고리영%호염추%류가인
IL-1RⅡ基因%adeasy XL系统%子宫内膜异位症
IL-1RⅡ基因%adeasy XL繫統%子宮內膜異位癥
IL-1RⅡ기인%adeasy XL계통%자궁내막이위증
目的:利用AdEasy XL系统,构建并鉴定IL-1RⅡ基因重组腺病毒载体,并在子宫内膜异位症(EM)细胞中表达.方法:PCR扩增含有IL-1RⅡ全长cDNA的片段,亚克隆到pShuttle-CMV穿梭质粒,经酶切和测序验证无误后,再经电转化与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选、酶切鉴定以及再次测序验证无误后得到阳性的重组质粒,经Pac Ⅰ酶切线性化再在293细胞中进行包装扩增,用ELISA检测IL-1RⅡ蛋白的表达.利用Adeasy XL系统的对照载体pShuttle-CMV-LacZ同上操作作为对照.收集的重组腺病毒感染原代培养的EM基质细胞,并以免疫组化法鉴定IL-1RⅡ表达.结果:测序证实连接后IL-1RⅡ序列完全正确;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;pShuttle-CMV-LacZ转染293细胞3 d后X-gal染色阳性,回收病毒可以重复感染293细胞,ELISA鉴定表达IL-1RⅡ可溶性蛋白,证明病毒包装成功.重组的腺病毒感染EM基质细胞后,免疫组化法证实IL-1RⅡ表达.结论:成功地构建了IL-1RⅡ基因重组腺病毒载体,并且在EM基质细胞中表达,为进一步研究IL-1RⅡ基因在EM中的作用乃至生物治疗都奠定了基础.
目的:利用AdEasy XL繫統,構建併鑒定IL-1RⅡ基因重組腺病毒載體,併在子宮內膜異位癥(EM)細胞中錶達.方法:PCR擴增含有IL-1RⅡ全長cDNA的片段,亞剋隆到pShuttle-CMV穿梭質粒,經酶切和測序驗證無誤後,再經電轉化與pAdEasy-1質粒在大腸桿菌BJ5183中進行同源重組產生腺病毒載體質粒.經過抗性篩選、酶切鑒定以及再次測序驗證無誤後得到暘性的重組質粒,經Pac Ⅰ酶切線性化再在293細胞中進行包裝擴增,用ELISA檢測IL-1RⅡ蛋白的錶達.利用Adeasy XL繫統的對照載體pShuttle-CMV-LacZ同上操作作為對照.收集的重組腺病毒感染原代培養的EM基質細胞,併以免疫組化法鑒定IL-1RⅡ錶達.結果:測序證實連接後IL-1RⅡ序列完全正確;抗性篩選及酶切鑒定均錶明重組腺病毒載體構建成功;pShuttle-CMV-LacZ轉染293細胞3 d後X-gal染色暘性,迴收病毒可以重複感染293細胞,ELISA鑒定錶達IL-1RⅡ可溶性蛋白,證明病毒包裝成功.重組的腺病毒感染EM基質細胞後,免疫組化法證實IL-1RⅡ錶達.結論:成功地構建瞭IL-1RⅡ基因重組腺病毒載體,併且在EM基質細胞中錶達,為進一步研究IL-1RⅡ基因在EM中的作用迺至生物治療都奠定瞭基礎.
목적:이용AdEasy XL계통,구건병감정IL-1RⅡ기인중조선병독재체,병재자궁내막이위증(EM)세포중표체.방법:PCR확증함유IL-1RⅡ전장cDNA적편단,아극륭도pShuttle-CMV천사질립,경매절화측서험증무오후,재경전전화여pAdEasy-1질립재대장간균BJ5183중진행동원중조산생선병독재체질립.경과항성사선、매절감정이급재차측서험증무오후득도양성적중조질립,경Pac Ⅰ매절선성화재재293세포중진행포장확증,용ELISA검측IL-1RⅡ단백적표체.이용Adeasy XL계통적대조재체pShuttle-CMV-LacZ동상조작작위대조.수집적중조선병독감염원대배양적EM기질세포,병이면역조화법감정IL-1RⅡ표체.결과:측서증실련접후IL-1RⅡ서렬완전정학;항성사선급매절감정균표명중조선병독재체구건성공;pShuttle-CMV-LacZ전염293세포3 d후X-gal염색양성,회수병독가이중복감염293세포,ELISA감정표체IL-1RⅡ가용성단백,증명병독포장성공.중조적선병독감염EM기질세포후,면역조화법증실IL-1RⅡ표체.결론:성공지구건료IL-1RⅡ기인중조선병독재체,병차재EM기질세포중표체,위진일보연구IL-1RⅡ기인재EM중적작용내지생물치료도전정료기출.
