生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
6期
989-994
,共6页
许成钢%范晓军%张志云%付月君%梁爱华
許成鋼%範曉軍%張誌雲%付月君%樑愛華
허성강%범효군%장지운%부월군%량애화
东亚钳蝎昆虫毒素%原核表达%Intein自剪切%虫试实验
東亞鉗蝎昆蟲毒素%原覈錶達%Intein自剪切%蟲試實驗
동아겸갈곤충독소%원핵표체%Intein자전절%충시실험
为获得重组蝎昆虫毒素BmK IT,通过PCR方法在BmK IT基因的3'端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB Intein基因下游的多克隆位点(MCS).将获得的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达.用Ni-NTA亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了CBD-Intein-BmK IThis6融合蛋白,并在柱上诱导Intein自剪切,成功去除融合子CBD-Intein.通过Superdex 75凝胶过滤层析获得了纯度达95%以上的BmK IThis6蛋白,该蛋白不仅具有正确的二级结构而且有生物活性.
為穫得重組蝎昆蟲毒素BmK IT,通過PCR方法在BmK IT基因的3'耑融閤瞭編碼6箇組氨痠殘基的覈苷痠序列,將其插入原覈錶達載體pTWIN1的內含肽Ssp DnaB Intein基因下遊的多剋隆位點(MCS).將穫得的錶達質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導融閤蛋白錶達.用Ni-NTA親和層析柱從菌體裂解液中純化瞭CBD-Intein-BmK IThis6融閤蛋白,併在柱上誘導Intein自剪切,成功去除融閤子CBD-Intein.通過Superdex 75凝膠過濾層析穫得瞭純度達95%以上的BmK IThis6蛋白,該蛋白不僅具有正確的二級結構而且有生物活性.
위획득중조갈곤충독소BmK IT,통과PCR방법재BmK IT기인적3'단융합료편마6개조안산잔기적핵감산서렬,장기삽입원핵표체재체pTWIN1적내함태Ssp DnaB Intein기인하유적다극륭위점(MCS).장획득적표체질립전화대장간균BL21(DE3)중,용IPTG유도융합단백표체.용Ni-NTA친화층석주종균체렬해액중순화료CBD-Intein-BmK IThis6융합단백,병재주상유도Intein자전절,성공거제융합자CBD-Intein.통과Superdex 75응효과려층석획득료순도체95%이상적BmK IThis6단백,해단백불부구유정학적이급결구이차유생물활성.
