现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2007年
6期
493-498
,共6页
丁细霞%Hoi-wah Tsoi%陈伟俊%丘立文%王压娣%廖志勇%袁国勇%车小燕
丁細霞%Hoi-wah Tsoi%陳偉俊%丘立文%王壓娣%廖誌勇%袁國勇%車小燕
정세하%Hoi-wah Tsoi%진위준%구립문%왕압제%료지용%원국용%차소연
禽流感病毒(H5N1)%非结构蛋白%单克隆抗体
禽流感病毒(H5N1)%非結構蛋白%單剋隆抗體
금류감병독(H5N1)%비결구단백%단극륭항체
为研制禽流感病毒(H5N1)非结构蛋白1(NS1)的特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性,本研究在分别表达了具有良好抗原性的A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白基础上,用A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光和免疫印迹对抗体的特异性进行鉴定,通过竞争抑制实验对单抗识别的抗原位点进行分析.结果共获得19株能识别4个H5N1-NS1蛋白不同抗原位点的mAb,亚类测定显示,5株为IgG2a、1株为IgG2b,另外13株为IgG1.这些mAb均与A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白特异性结合,免疫荧光检测均与A型流感病毒(H1N1和H3N2)有交叉反应,而与B型流感病毒无交叉现象.表明成功获得特异性针对H5N1-NS1蛋白的mAb,为进一步研究禽流感病毒NS1蛋白的结构与功能奠定基础.
為研製禽流感病毒(H5N1)非結構蛋白1(NS1)的特異性單剋隆抗體(mAb),併鑒定其特異性,本研究在分彆錶達瞭具有良好抗原性的A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重組蛋白基礎上,用A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞進行融閤,間接ELISA篩選暘性的雜交瘤細胞,併結閤免疫熒光和免疫印跡對抗體的特異性進行鑒定,通過競爭抑製實驗對單抗識彆的抗原位點進行分析.結果共穫得19株能識彆4箇H5N1-NS1蛋白不同抗原位點的mAb,亞類測定顯示,5株為IgG2a、1株為IgG2b,另外13株為IgG1.這些mAb均與A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重組蛋白特異性結閤,免疫熒光檢測均與A型流感病毒(H1N1和H3N2)有交扠反應,而與B型流感病毒無交扠現象.錶明成功穫得特異性針對H5N1-NS1蛋白的mAb,為進一步研究禽流感病毒NS1蛋白的結構與功能奠定基礎.
위연제금류감병독(H5N1)비결구단백1(NS1)적특이성단극륭항체(mAb),병감정기특이성,본연구재분별표체료구유량호항원성적A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1화A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1중조단백기출상,용A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1단백면역BALB/c소서,취기비세포여소서골수류세포진행융합,간접ELISA사선양성적잡교류세포,병결합면역형광화면역인적대항체적특이성진행감정,통과경쟁억제실험대단항식별적항원위점진행분석.결과공획득19주능식별4개H5N1-NS1단백불동항원위점적mAb,아류측정현시,5주위IgG2a、1주위IgG2b,령외13주위IgG1.저사mAb균여A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1화A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1중조단백특이성결합,면역형광검측균여A형류감병독(H1N1화H3N2)유교차반응,이여B형류감병독무교차현상.표명성공획득특이성침대H5N1-NS1단백적mAb,위진일보연구금류감병독NS1단백적결구여공능전정기출.
