中草药
中草藥
중초약
CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
2007年
10期
1548-1551
,共4页
杨春贤%周启贵%陈敏%彭梅芳%张婷婷%张磊%廖志华
楊春賢%週啟貴%陳敏%彭梅芳%張婷婷%張磊%廖誌華
양춘현%주계귀%진민%팽매방%장정정%장뢰%료지화
颠茄%1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶%莨菪碱-6β-羟化酶%发根%再生
顛茄%1,4-丁二胺-氮-甲基轉移酶%莨菪堿-6β-羥化酶%髮根%再生
전가%1,4-정이알-담-갑기전이매%랑탕감-6β-간화매%발근%재생
目的 获得1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)和莨菪碱-6β-羟化酶(hyoscyamine 6β-hydroxylase,H6H)双基因共转化的颠茄发根的再生植株.方法 选用PMT和H6H双基因共转化的东莨菪碱高产发根单克隆T4,用1/2MS+1.0 mg/LNAA固体培养基培养1、5、10 d后,转入1/2MS固体培养基中诱导不定芽和不定根,培养条件均为(25±1)℃,55 μmol/(m2·s),12 h/d.采用PCR扩增检测再生植株的PMT、H6H和NPT-Ⅱ.结果 发根在1/2MS+1.0 mg/LNAA固体培养基上培养5 d后,转入1/2MS固体培养基上培养,60%的外植体能自发长出不定芽,1/2MS+0.1 mg/LIBA固体培养基中诱导生根较1/2MS固体培养基强,15 d产生的条数平均为9条,形成了完整的再生植株.PCR检测表明所有再生植株均为颠茄的转基因再生植株.结论 建立了颠茄转化发根再生体系,为实现颠茄托品烷类生物碱的代谢工程及开展分子育种奠定了基础.
目的 穫得1,4-丁二胺-氮-甲基轉移酶(putrescine N-methyltransferase,PMT)和莨菪堿-6β-羥化酶(hyoscyamine 6β-hydroxylase,H6H)雙基因共轉化的顛茄髮根的再生植株.方法 選用PMT和H6H雙基因共轉化的東莨菪堿高產髮根單剋隆T4,用1/2MS+1.0 mg/LNAA固體培養基培養1、5、10 d後,轉入1/2MS固體培養基中誘導不定芽和不定根,培養條件均為(25±1)℃,55 μmol/(m2·s),12 h/d.採用PCR擴增檢測再生植株的PMT、H6H和NPT-Ⅱ.結果 髮根在1/2MS+1.0 mg/LNAA固體培養基上培養5 d後,轉入1/2MS固體培養基上培養,60%的外植體能自髮長齣不定芽,1/2MS+0.1 mg/LIBA固體培養基中誘導生根較1/2MS固體培養基彊,15 d產生的條數平均為9條,形成瞭完整的再生植株.PCR檢測錶明所有再生植株均為顛茄的轉基因再生植株.結論 建立瞭顛茄轉化髮根再生體繫,為實現顛茄託品烷類生物堿的代謝工程及開展分子育種奠定瞭基礎.
목적 획득1,4-정이알-담-갑기전이매(putrescine N-methyltransferase,PMT)화랑탕감-6β-간화매(hyoscyamine 6β-hydroxylase,H6H)쌍기인공전화적전가발근적재생식주.방법 선용PMT화H6H쌍기인공전화적동랑탕감고산발근단극륭T4,용1/2MS+1.0 mg/LNAA고체배양기배양1、5、10 d후,전입1/2MS고체배양기중유도불정아화불정근,배양조건균위(25±1)℃,55 μmol/(m2·s),12 h/d.채용PCR확증검측재생식주적PMT、H6H화NPT-Ⅱ.결과 발근재1/2MS+1.0 mg/LNAA고체배양기상배양5 d후,전입1/2MS고체배양기상배양,60%적외식체능자발장출불정아,1/2MS+0.1 mg/LIBA고체배양기중유도생근교1/2MS고체배양기강,15 d산생적조수평균위9조,형성료완정적재생식주.PCR검측표명소유재생식주균위전가적전기인재생식주.결론 건립료전가전화발근재생체계,위실현전가탁품완류생물감적대사공정급개전분자육충전정료기출.
