CAJ | 학술논문

目的:应用基因芯片技术,分析siRNA抑制Pleiotrophin基因表达后,Pten-/- MEF241细胞基因表达谱的变化.方法:选用Agilent公司的小鼠oligo芯片,分别提取siRNA抑制Pleiotrophin基因表达前后Pten-/-MEF241细胞的RNA,反转成cDNA,进一步荧光标记后进行芯片杂交,杂交结果经扫描及软件分析,最后Ration值为cy3/cy5(即实验组/对照组).差异基因筛选标准为正标Ratio(Cy3/Cy5)≥2同时反标Ratio(Cy3/Cy5)≤0.5.部分上调及下调基因的表达水平用RT-PCR及Northern杂交进行了验证.结果:siRNA介导Pleiotrophin基因沉默后,表达上调2倍以上的基因有240个,下调0.5倍以上的基因有129个.其中,上调10倍以上的基因有与DDK综合征相关的Schlafen家族成员Slfn2、3、4,基质蛋白金属酶Mmp3、10、13,白介素IL-1a、IL-f6等;下调5倍以上的基因有钙结合蛋白S100a8、视黄醇结合蛋白Rbp4、二肽酶Dpep1等.RT-PCR及Northern杂交验证结果与芯片结果吻合.结论:应用基因表达谱芯片成功分析了RNAi抑制Pleiotrophin基因表达后Pten-/- MEF241细胞基因表达谱的变化,挑选并鉴定出一批有意义的基因,为后续的深入研究提供了基础.
목적:응용기인심편기술,분석siRNA억제Pleiotrophin기인표체후,Pten-/- MEF241세포기인표체보적변화.방법:선용Agilent공사적소서oligo심편,분별제취siRNA억제Pleiotrophin기인표체전후Pten-/-MEF241세포적RNA,반전성cDNA,진일보형광표기후진행심편잡교,잡교결과경소묘급연건분석,최후Ration치위cy3/cy5(즉실험조/대조조).차이기인사선표준위정표Ratio(Cy3/Cy5)≥2동시반표Ratio(Cy3/Cy5)≤0.5.부분상조급하조기인적표체수평용RT-PCR급Northern잡교진행료험증.결과:siRNA개도Pleiotrophin기인침묵후,표체상조2배이상적기인유240개,하조0.5배이상적기인유129개.기중,상조10배이상적기인유여DDK종합정상관적Schlafen가족성원Slfn2、3、4,기질단백금속매Mmp3、10、13,백개소IL-1a、IL-f6등;하조5배이상적기인유개결합단백S100a8、시황순결합단백Rbp4、이태매Dpep1등.RT-PCR급Northern잡교험증결과여심편결과문합.결론:응용기인표체보심편성공분석료RNAi억제Pleiotrophin기인표체후Pten-/- MEF241세포기인표체보적변화,도선병감정출일비유의의적기인,위후속적심입연구제공료기출.