免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2007年
5期
478-481
,共4页
付建芳%夏永娟%秦红%王世鄂%金晓航%初晨宇%黄威权
付建芳%夏永娟%秦紅%王世鄂%金曉航%初晨宇%黃威權
부건방%하영연%진홍%왕세악%금효항%초신우%황위권
溶藻弧菌%单链抗体%原核表达%免疫原性%基因工程疫苗
溶藻弧菌%單鏈抗體%原覈錶達%免疫原性%基因工程疫苗
용조호균%단련항체%원핵표체%면역원성%기인공정역묘
目的 构建溶藻弧菌抗独特型单链抗体(scFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定.方法从分泌溶藻弧菌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中已获得的该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建scFv及原核表达载体pET32a-AL,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达.表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定.结果 scFv基因序列全长747碱基对,编码249个氨基酸,符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基.ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有藻弧菌一样的免疫原性.结论 成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体scFv原核表达载体并表达于包涵体中,表达的融合蛋白具有与溶藻弧菌一样的免疫原性,为溶藻弧菌抗独特型单链抗体scFv成为鱼用基因工程疫苗奠定了初步基础.
目的 構建溶藻弧菌抗獨特型單鏈抗體(scFv)的原覈錶達載體,併對其錶達的蛋白進行免疫原性鑒定.方法從分泌溶藻弧菌抗獨特型單剋隆抗體的雜交瘤細胞株(2F4)中已穫得的該抗體重鏈可變區基因(VH)和輕鏈可變區基因(VL),通過基因重組構建scFv及原覈錶達載體pET32a-AL,轉化大腸桿菌BL21後用IPTG誘導錶達.錶達後的重組蛋白利用動物免疫試驗進行免疫原性鑒定.結果 scFv基因序列全長747堿基對,編碼249箇氨基痠,符閤小鼠免疫毬蛋白可變區基因特徵,含有框架區(FRs)、抗原互補決定區(CDRs)及抗體特徵性的半胱氨痠殘基.ELISA測定和動物免疫試驗顯示抗獨特性抗體的scFv具有藻弧菌一樣的免疫原性.結論 成功構建瞭抗溶藻弧菌獨特型抗體scFv原覈錶達載體併錶達于包涵體中,錶達的融閤蛋白具有與溶藻弧菌一樣的免疫原性,為溶藻弧菌抗獨特型單鏈抗體scFv成為魚用基因工程疫苗奠定瞭初步基礎.
목적 구건용조호균항독특형단련항체(scFv)적원핵표체재체,병대기표체적단백진행면역원성감정.방법종분비용조호균항독특형단극륭항체적잡교류세포주(2F4)중이획득적해항체중련가변구기인(VH)화경련가변구기인(VL),통과기인중조구건scFv급원핵표체재체pET32a-AL,전화대장간균BL21후용IPTG유도표체.표체후적중조단백이용동물면역시험진행면역원성감정.결과 scFv기인서렬전장747감기대,편마249개안기산,부합소서면역구단백가변구기인특정,함유광가구(FRs)、항원호보결정구(CDRs)급항체특정성적반광안산잔기.ELISA측정화동물면역시험현시항독특성항체적scFv구유조호균일양적면역원성.결론 성공구건료항용조호균독특형항체scFv원핵표체재체병표체우포함체중,표체적융합단백구유여용조호균일양적면역원성,위용조호균항독특형단련항체scFv성위어용기인공정역묘전정료초보기출.
