武汉植物学研究
武漢植物學研究
무한식물학연구
JOURNAL OF WUHAN BOTANICAL RESEARCH
2007年
4期
371-376
,共6页
邓艳芹%李作洲%王传华%黄宏文
鄧豔芹%李作洲%王傳華%黃宏文
산염근%리작주%왕전화%황굉문
蜜环菌%菌索%DNA提取%琼脂固体培养基%多醣
蜜環菌%菌索%DNA提取%瓊脂固體培養基%多醣
밀배균%균색%DNA제취%경지고체배양기%다당
野外采集的蜜环菌[Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel]在提取DNA前需要分离获得纯化的菌丝体.常规液体培养获得菌丝团的方法感杂率较高,采集固体培养基表面cellophane膜上形成的菌丝则难以获得足量的DNA提取材料.蜜环菌细胞内含有大量多醣类物质,也使得蜜环菌高质量DNA的提取存在一定的困难.本研究通过改进试验,提供一个直接从琼脂固体培养基培养的蜜环菌菌索中提取高质量DNA的方法.其中样品的预先冻融处理方法可以促使蜜环菌菌索与琼脂分离;而在裂解提取缓冲液裂解材料细胞后加入1.25 mol/L KAc溶液,则有利于除去蜜环菌细胞内的多醣类物质以及残留的少量琼脂.通过琼脂糖电泳、紫外分光光度计对DNA浓度及OD值的测定、ISSR引物的PCR扩增以及酶切产物的PCR扩增等方法的检测,结果均表明该方法提取的DNA质量较好,符合进一步进行分子生物学研究的要求.
野外採集的蜜環菌[Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel]在提取DNA前需要分離穫得純化的菌絲體.常規液體培養穫得菌絲糰的方法感雜率較高,採集固體培養基錶麵cellophane膜上形成的菌絲則難以穫得足量的DNA提取材料.蜜環菌細胞內含有大量多醣類物質,也使得蜜環菌高質量DNA的提取存在一定的睏難.本研究通過改進試驗,提供一箇直接從瓊脂固體培養基培養的蜜環菌菌索中提取高質量DNA的方法.其中樣品的預先凍融處理方法可以促使蜜環菌菌索與瓊脂分離;而在裂解提取緩遲液裂解材料細胞後加入1.25 mol/L KAc溶液,則有利于除去蜜環菌細胞內的多醣類物質以及殘留的少量瓊脂.通過瓊脂糖電泳、紫外分光光度計對DNA濃度及OD值的測定、ISSR引物的PCR擴增以及酶切產物的PCR擴增等方法的檢測,結果均錶明該方法提取的DNA質量較好,符閤進一步進行分子生物學研究的要求.
야외채집적밀배균[Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel]재제취DNA전수요분리획득순화적균사체.상규액체배양획득균사단적방법감잡솔교고,채집고체배양기표면cellophane막상형성적균사칙난이획득족량적DNA제취재료.밀배균세포내함유대량다당류물질,야사득밀배균고질량DNA적제취존재일정적곤난.본연구통과개진시험,제공일개직접종경지고체배양기배양적밀배균균색중제취고질량DNA적방법.기중양품적예선동융처리방법가이촉사밀배균균색여경지분리;이재렬해제취완충액렬해재료세포후가입1.25 mol/L KAc용액,칙유리우제거밀배균세포내적다당류물질이급잔류적소량경지.통과경지당전영、자외분광광도계대DNA농도급OD치적측정、ISSR인물적PCR확증이급매절산물적PCR확증등방법적검측,결과균표명해방법제취적DNA질량교호,부합진일보진행분자생물학연구적요구.
