CAJ | 학술논문

目的:分析骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白43表达的影响.方法:实验于2002-06/2003-06在中国医科大学实验动物中心完成.选取3月龄Wistar大鼠64只,随机选取4只大鼠作骨髓间充质细胞的分与培养.其余60只随机分成3组:细胞移植组(n=24),磷酸盐缓冲液组(n=24),空白对照组(n=12).骨髓间充质干细胞提取自成鼠的股骨骨髓,经过培养、鉴定及传代,细胞传3代,待细胞大约长至50%汇合时,吸弃培养基,置于37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中培育30 min,调整细胞密度以备移植.将大鼠麻醉后,无菌条件下用改良Allen打击装置,制作大鼠脊髓损伤动物模型,脊髓损伤后第7天,细胞移植组以微量注射器缓慢注入含间充质干细胞(106/mL)的培养液5μL,磷酸盐缓冲液组注入等量磷酸盐缓冲液5 μL,空白对照组未制作脊髓损伤,分别于移植术后1、3、5 d以及术后7、14、28 d麻醉处死大鼠,细胞移植组与磷酸盐缓冲液组取出损伤节段的脊髓(4只/时点),空白对照组于同一节段取出相应脊髓(2只/时点).应用反转录-聚合酶链反应和免疫组化法观察间充质干细胞移植后大鼠脊髓损伤区生长相关蛋白43基因表达的变化.结果:各组实验动物均全部进入结果分析,无脱落.①生长相关蛋白43 mRNA的表达:生长相关蛋白43 mRNA在正常大鼠脊髓组织中呈弱表达.间充质干细胞移植术后第1、3、7天时间点,细胞移植组生长相关蛋白43 mRNA逐渐增高表达,与磷酸盐缓冲液组比较差别有统计学意义(P＜0.05).②生长相关蛋白43的表达:生长相关蛋白43在正常大鼠脊髓组织中有一定表达,间充质干细胞移植术后第7、14、28天,细胞移植组生长相关蛋白43持续高水平表达,与磷酸盐缓冲液组比较差别有统计学意义(P＜0.05).结论:间充质干细胞在移植后通过上调生长相关蛋白43基因的表达从而促进轴突的再生,可能是治疗脊髓损伤的重要机制. 目的:分析骨髓間充質榦細胞移植對大鼠脊髓損傷後生長相關蛋白43錶達的影響.方法:實驗于2002-06/2003-06在中國醫科大學實驗動物中心完成.選取3月齡Wistar大鼠64隻,隨機選取4隻大鼠作骨髓間充質細胞的分與培養.其餘60隻隨機分成3組:細胞移植組(n=24),燐痠鹽緩遲液組(n=24),空白對照組(n=12).骨髓間充質榦細胞提取自成鼠的股骨骨髓,經過培養、鑒定及傳代,細胞傳3代,待細胞大約長至50%彙閤時,吸棄培養基,置于37℃,體積分數為0.05的CO2培養箱中培育30 min,調整細胞密度以備移植.將大鼠痳醉後,無菌條件下用改良Allen打擊裝置,製作大鼠脊髓損傷動物模型,脊髓損傷後第7天,細胞移植組以微量註射器緩慢註入含間充質榦細胞(106/mL)的培養液5μL,燐痠鹽緩遲液組註入等量燐痠鹽緩遲液5 μL,空白對照組未製作脊髓損傷,分彆于移植術後1、3、5 d以及術後7、14、28 d痳醉處死大鼠,細胞移植組與燐痠鹽緩遲液組取齣損傷節段的脊髓(4隻/時點),空白對照組于同一節段取齣相應脊髓(2隻/時點).應用反轉錄-聚閤酶鏈反應和免疫組化法觀察間充質榦細胞移植後大鼠脊髓損傷區生長相關蛋白43基因錶達的變化.結果:各組實驗動物均全部進入結果分析,無脫落.①生長相關蛋白43 mRNA的錶達:生長相關蛋白43 mRNA在正常大鼠脊髓組織中呈弱錶達.間充質榦細胞移植術後第1、3、7天時間點,細胞移植組生長相關蛋白43 mRNA逐漸增高錶達,與燐痠鹽緩遲液組比較差彆有統計學意義(P＜0.05).②生長相關蛋白43的錶達:生長相關蛋白43在正常大鼠脊髓組織中有一定錶達,間充質榦細胞移植術後第7、14、28天,細胞移植組生長相關蛋白43持續高水平錶達,與燐痠鹽緩遲液組比較差彆有統計學意義(P＜0.05).結論:間充質榦細胞在移植後通過上調生長相關蛋白43基因的錶達從而促進軸突的再生,可能是治療脊髓損傷的重要機製.
목적:분석골수간충질간세포이식대대서척수손상후생장상관단백43표체적영향.방법:실험우2002-06/2003-06재중국의과대학실험동물중심완성.선취3월령Wistar대서64지,수궤선취4지대서작골수간충질세포적분여배양.기여60지수궤분성3조:세포이식조(n=24),린산염완충액조(n=24),공백대조조(n=12).골수간충질간세포제취자성서적고골골수,경과배양、감정급전대,세포전3대,대세포대약장지50%회합시,흡기배양기,치우37℃,체적분수위0.05적CO2배양상중배육30 min,조정세포밀도이비이식.장대서마취후,무균조건하용개량Allen타격장치,제작대서척수손상동물모형,척수손상후제7천,세포이식조이미량주사기완만주입함간충질간세포(106/mL)적배양액5μL,린산염완충액조주입등량린산염완충액5 μL,공백대조조미제작척수손상,분별우이식술후1、3、5 d이급술후7、14、28 d마취처사대서,세포이식조여린산염완충액조취출손상절단적척수(4지/시점),공백대조조우동일절단취출상응척수(2지/시점).응용반전록-취합매련반응화면역조화법관찰간충질간세포이식후대서척수손상구생장상관단백43기인표체적변화.결과:각조실험동물균전부진입결과분석,무탈락.①생장상관단백43 mRNA적표체:생장상관단백43 mRNA재정상대서척수조직중정약표체.간충질간세포이식술후제1、3、7천시간점,세포이식조생장상관단백43 mRNA축점증고표체,여린산염완충액조비교차별유통계학의의(P＜0.05).②생장상관단백43적표체:생장상관단백43재정상대서척수조직중유일정표체,간충질간세포이식술후제7、14、28천,세포이식조생장상관단백43지속고수평표체,여린산염완충액조비교차별유통계학의의(P＜0.05).결론:간충질간세포재이식후통과상조생장상관단백43기인적표체종이촉진축돌적재생,가능시치료척수손상적중요궤제.