重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2006年
7期
606-608
,共3页
黄刚%何凤田%连继勤%李蓉芬%胡颖
黃剛%何鳳田%連繼勤%李蓉芬%鬍穎
황강%하봉전%련계근%리용분%호영
B淋巴细胞刺激因子(BLyS)%毕赤酵母%突变体
B淋巴細胞刺激因子(BLyS)%畢赤酵母%突變體
B림파세포자격인자(BLyS)%필적효모%돌변체
目的构建人BLyS胞外区(soluble BLyS)突变体毕赤酵母分泌型表达载体, 为深入探讨BLyS的功能和机制创造条件.方法以构建的人pUC19/sBLyS及其突变体重组质粒为模板,利用PCR扩增出6×his/sBLyS及其突变体的cDNA,克隆入酵母表达载体pPIC9K;行序列测定后电转化入毕赤酵母GS115,并进行表型筛选和G418抗性筛选;对高拷贝整合的重组酵母表达菌株进行PCR鉴定.结果构建得到酵母融合重组表达载体pPIC9K/6×his/sBLyS及其突变体;经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母表达菌株.结论成功构建了人sBLyS及其突变体的真核表达载体,为获得人sBLyS及其突变体蛋白,进一步研究BLyS的生物学功能奠定了基础.
目的構建人BLyS胞外區(soluble BLyS)突變體畢赤酵母分泌型錶達載體, 為深入探討BLyS的功能和機製創造條件.方法以構建的人pUC19/sBLyS及其突變體重組質粒為模闆,利用PCR擴增齣6×his/sBLyS及其突變體的cDNA,剋隆入酵母錶達載體pPIC9K;行序列測定後電轉化入畢赤酵母GS115,併進行錶型篩選和G418抗性篩選;對高拷貝整閤的重組酵母錶達菌株進行PCR鑒定.結果構建得到酵母融閤重組錶達載體pPIC9K/6×his/sBLyS及其突變體;經G418濃度梯度篩選及PCR鑒定得到高拷貝整閤的重組酵母錶達菌株.結論成功構建瞭人sBLyS及其突變體的真覈錶達載體,為穫得人sBLyS及其突變體蛋白,進一步研究BLyS的生物學功能奠定瞭基礎.
목적구건인BLyS포외구(soluble BLyS)돌변체필적효모분비형표체재체, 위심입탐토BLyS적공능화궤제창조조건.방법이구건적인pUC19/sBLyS급기돌변체중조질립위모판,이용PCR확증출6×his/sBLyS급기돌변체적cDNA,극륭입효모표체재체pPIC9K;행서렬측정후전전화입필적효모GS115,병진행표형사선화G418항성사선;대고고패정합적중조효모표체균주진행PCR감정.결과구건득도효모융합중조표체재체pPIC9K/6×his/sBLyS급기돌변체;경G418농도제도사선급PCR감정득도고고패정합적중조효모표체균주.결론성공구건료인sBLyS급기돌변체적진핵표체재체,위획득인sBLyS급기돌변체단백,진일보연구BLyS적생물학공능전정료기출.
