CAJ | 학술논문

目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法.方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定.结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1:4×103、l:8×104和1:1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108 L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4 ng/ml以上的DNA.结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础.
목적제비항DNA단극륭항체,용이건립특이、령민、간편적외원성DNA잔류량측정방법.방법장소우흉선DNA여양리자화적우혈청백단백통과Mannich반응련접성위완전항원,면역BALB/c소서득도적비세포여SP2/0소서골수류세포융합,획득은정분비항DNA단항적잡교류세포주,대항체진행순화、농축급감정.결과득도3주가은정분비항DNA단항적잡교류세포주,단항적ELISA간접효개분별위1:4×103、l:8×104화1:1×103;아형분별위IgM/κ、IgM/λ화IgM/κ;친화력상수분별위3.96×108、4.04×109화1.26×108 L/mol;3주세포분비적단항여ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA화H.S.DNA균유교고적결합능력,이대RNA、BSA화락단백결합교약혹불능결합;3주세포분비적단항식별3개불동적항원표위;가검출4 ng/ml이상적DNA.결론성공제비료3주세포분비적항DNA단항,위외원성DNA잔류량면역측정방법적심입연구전정료기출.