动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2006年
1期
54-57
,共4页
杨宏倩%李博%蔡宏%朱玉贤
楊宏倩%李博%蔡宏%硃玉賢
양굉천%리박%채굉%주옥현
结核病%Mtb8.4重组原核表达载体%核酸疫苗
結覈病%Mtb8.4重組原覈錶達載體%覈痠疫苗
결핵병%Mtb8.4중조원핵표체재체%핵산역묘
低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达.以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coli BL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达.结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功.构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗.原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果.
低分子質量蛋白抗原Mtb8.4是一種非常重要的結覈分支桿菌抗原,為瞭研製結覈病覈痠疫苗和進行結覈病的診斷,分彆將其構建到原覈和真覈載體中進行錶達.以結覈分支桿菌標準菌株H37Rv基因組DNA為模闆,PCR擴增目的基因Mtb8.4,擴增產物酶切後分彆剋隆到真覈錶達載體pJW4303和原覈錶達載體pGEX-4T-1中,構成重組真覈錶達載體pJW-Mtb8.4和重組原覈錶達載體pGEX-Mtb8.4,用限製性內切酶消化,PCR擴增及DNA序列分析等多種方法鑒定;併將正確構建的原覈錶達載體轉入E.coli BL21(DE3)plysS中,IPTG誘導錶達.結果錶明,重組真覈錶達載體pJW-Mtb8.4和重組原覈錶達載體pGEX-Mtb8.4構建成功.構建的真覈重組質粒pJW-Mtb8.4即可作為結覈病DNA疫苗.原覈錶達載體pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功錶達,將錶達蛋白進行純化,作為保護性結覈分支桿菌抗原以便檢測DNA疫苗的免疫效果.
저분자질량단백항원Mtb8.4시일충비상중요적결핵분지간균항원,위료연제결핵병핵산역묘화진행결핵병적진단,분별장기구건도원핵화진핵재체중진행표체.이결핵분지간균표준균주H37Rv기인조DNA위모판,PCR확증목적기인Mtb8.4,확증산물매절후분별극륭도진핵표체재체pJW4303화원핵표체재체pGEX-4T-1중,구성중조진핵표체재체pJW-Mtb8.4화중조원핵표체재체pGEX-Mtb8.4,용한제성내절매소화,PCR확증급DNA서렬분석등다충방법감정;병장정학구건적원핵표체재체전입E.coli BL21(DE3)plysS중,IPTG유도표체.결과표명,중조진핵표체재체pJW-Mtb8.4화중조원핵표체재체pGEX-Mtb8.4구건성공.구건적진핵중조질립pJW-Mtb8.4즉가작위결핵병DNA역묘.원핵표체재체pGEX-Mtb8.4재BL21(DE3)plysS중성공표체,장표체단백진행순화,작위보호성결핵분지간균항원이편검측DNA역묘적면역효과.
