癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2005年
12期
1474-1478
,共5页
梁永钜%杨小平%卫剑文%符立梧%姜孝玉%陈尚武%杨文利
樑永鉅%楊小平%衛劍文%符立梧%薑孝玉%陳尚武%楊文利
량영거%양소평%위검문%부립오%강효옥%진상무%양문리
重组海蛇碱性磷脂酶A2%抗肿瘤活性%酶活性%S180肉瘤%定点突变
重組海蛇堿性燐脂酶A2%抗腫瘤活性%酶活性%S180肉瘤%定點突變
중조해사감성린지매A2%항종류활성%매활성%S180육류%정점돌변
背景与目的:蛇毒磷脂酶A2(snake venom phospholipase A2,SVPLA2)是一类分子量为14 ku左右的蛋白家族,除了酶活性,该蛋白还具有多种药理活性.迄今,陆地蛇PLA2的结构与功能关系特别是其酶活性与药理活性的关系已被广泛研究,但对海蛇PLA2的研究则较少.本文旨在研究重组平颏海蛇碱性磷脂酶A2(recombinant sea snake basic phospholipase A2,rSSBPLA2)及其突变体(rN48和rK49)体内外抗肿瘤作用,并探讨酶活性相关位点对抑瘤作用的影响.方法:对酶活性相关位点48、49位氨基酸进行His→Asn和Asp→Lys的定点突变,用MTF法检测rSSBPLA2及其突变体rN48和rK49对人原髓白血病细胞HL-60、人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH、人胃癌细胞MGC-803和人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;用小鼠S180移植瘤和艾氏腹水癌(EAC)模型对rSSBPLA2进行抗肿瘤作用观察;并检测突变体对小鼠移植瘤的抗瘤活性.结果:与rSSBPLA2相比较,突变体rN48和rK49的相对酶活力分别为0和5%.rSSBPLA2对HL-60细胞、SK-N-SH细胞和MGC-803细胞的IC50值分别为(45.28±0.09)μg/ml、(57.07±0.12)μg/ml和(69.34±0.35)μg/ml,对HepG2细胞生长没有抑制作用;而rN48和rK49对以上细胞均无抑制作用.rSSBPLA2对小鼠S180移植瘤具有明显的抑制作用,按2 mg/kg(qd×10)、2mg/kg(q2d×5)、4 mg/kg(qd×1)、4 mg/kg(q5d×2)实验给药,其抑瘤率分别为50.8%、43.2%、38.2%、55.5%;rSSBPLA2按4 mg/kg(q5d×2)剂量给药时,对EAC抑瘤率为33.5%,与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01).而突变体rN48和rK49分别按4 mg/kg(q2d×5)和7 mg/kg(qd×10)方案进行实验,无明显抗肿瘤作用.结论:rSSBPLA2的抑瘤活性可能与其酶活性密切相关.
揹景與目的:蛇毒燐脂酶A2(snake venom phospholipase A2,SVPLA2)是一類分子量為14 ku左右的蛋白傢族,除瞭酶活性,該蛋白還具有多種藥理活性.迄今,陸地蛇PLA2的結構與功能關繫特彆是其酶活性與藥理活性的關繫已被廣汎研究,但對海蛇PLA2的研究則較少.本文旨在研究重組平頦海蛇堿性燐脂酶A2(recombinant sea snake basic phospholipase A2,rSSBPLA2)及其突變體(rN48和rK49)體內外抗腫瘤作用,併探討酶活性相關位點對抑瘤作用的影響.方法:對酶活性相關位點48、49位氨基痠進行His→Asn和Asp→Lys的定點突變,用MTF法檢測rSSBPLA2及其突變體rN48和rK49對人原髓白血病細胞HL-60、人神經母細胞瘤細胞SK-N-SH、人胃癌細胞MGC-803和人肝癌細胞HepG2的生長抑製作用;用小鼠S180移植瘤和艾氏腹水癌(EAC)模型對rSSBPLA2進行抗腫瘤作用觀察;併檢測突變體對小鼠移植瘤的抗瘤活性.結果:與rSSBPLA2相比較,突變體rN48和rK49的相對酶活力分彆為0和5%.rSSBPLA2對HL-60細胞、SK-N-SH細胞和MGC-803細胞的IC50值分彆為(45.28±0.09)μg/ml、(57.07±0.12)μg/ml和(69.34±0.35)μg/ml,對HepG2細胞生長沒有抑製作用;而rN48和rK49對以上細胞均無抑製作用.rSSBPLA2對小鼠S180移植瘤具有明顯的抑製作用,按2 mg/kg(qd×10)、2mg/kg(q2d×5)、4 mg/kg(qd×1)、4 mg/kg(q5d×2)實驗給藥,其抑瘤率分彆為50.8%、43.2%、38.2%、55.5%;rSSBPLA2按4 mg/kg(q5d×2)劑量給藥時,對EAC抑瘤率為33.5%,與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01).而突變體rN48和rK49分彆按4 mg/kg(q2d×5)和7 mg/kg(qd×10)方案進行實驗,無明顯抗腫瘤作用.結論:rSSBPLA2的抑瘤活性可能與其酶活性密切相關.
배경여목적:사독린지매A2(snake venom phospholipase A2,SVPLA2)시일류분자량위14 ku좌우적단백가족,제료매활성,해단백환구유다충약리활성.흘금,륙지사PLA2적결구여공능관계특별시기매활성여약리활성적관계이피엄범연구,단대해사PLA2적연구칙교소.본문지재연구중조평해해사감성린지매A2(recombinant sea snake basic phospholipase A2,rSSBPLA2)급기돌변체(rN48화rK49)체내외항종류작용,병탐토매활성상관위점대억류작용적영향.방법:대매활성상관위점48、49위안기산진행His→Asn화Asp→Lys적정점돌변,용MTF법검측rSSBPLA2급기돌변체rN48화rK49대인원수백혈병세포HL-60、인신경모세포류세포SK-N-SH、인위암세포MGC-803화인간암세포HepG2적생장억제작용;용소서S180이식류화애씨복수암(EAC)모형대rSSBPLA2진행항종류작용관찰;병검측돌변체대소서이식류적항류활성.결과:여rSSBPLA2상비교,돌변체rN48화rK49적상대매활력분별위0화5%.rSSBPLA2대HL-60세포、SK-N-SH세포화MGC-803세포적IC50치분별위(45.28±0.09)μg/ml、(57.07±0.12)μg/ml화(69.34±0.35)μg/ml,대HepG2세포생장몰유억제작용;이rN48화rK49대이상세포균무억제작용.rSSBPLA2대소서S180이식류구유명현적억제작용,안2 mg/kg(qd×10)、2mg/kg(q2d×5)、4 mg/kg(qd×1)、4 mg/kg(q5d×2)실험급약,기억류솔분별위50.8%、43.2%、38.2%、55.5%;rSSBPLA2안4 mg/kg(q5d×2)제량급약시,대EAC억류솔위33.5%,여대조조비교균유현저성차이(P＜0.01).이돌변체rN48화rK49분별안4 mg/kg(q2d×5)화7 mg/kg(qd×10)방안진행실험,무명현항종류작용.결론:rSSBPLA2적억류활성가능여기매활성밀절상관.
