CAJ | 학술논문

为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoprotein A-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体,分别为apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),和apoA-Ⅰ(L195C).观察比较各种野生型及突变apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量和二级结构稳定性及其脂质结合能力.结果显示,野生型apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano和apoA-Ⅰ(L195C)的α螺旋含量分别为54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,和54±1%,各种蛋白的α螺旋含量无显著性差异(P＞0.05).野生型apoA-Ⅰ的变性标准自由能(△G0 D)为10.5 kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)和apoA-Ⅰ Milano的△GoD比野生型低2.1 kJ/mol;而apoA-Ⅰ(K129C)的△GoD比野生型apoA-Ⅰ高1.6 kJ/mol.与野生型apoA-Ⅰ相比,apoA-Ⅰ(K129C)和apoA-Ⅰ(L195C)两个突变体与脂质结合能力明显下降(P＜0.05),而其它半胱氨酸突变体(包括apo A-ⅠMilano)在脂质结合动力学方面与野生型apoA-Ⅰ无明显差异.以上结果提示,不同位点发生的半胱氨酸突变对apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量无明显影响,但对蛋白的二级结构稳定性和脂质结合能力影响不尽相同.
위탐토인재지단백A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoprotein A-Ⅰ)α라선불동위점적반광안산돌변후,대단백이급결구화지질결합능력적영향,이용정점유변기술구건apoA-Ⅰ적천연반광안산돌변체apoA-ⅠMilano(R173C),급기타α라선편단상적반광안산돌변체,분별위apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),화apoA-Ⅰ(L195C).관찰비교각충야생형급돌변apoA-Ⅰ단체단백적α라선함량화이급결구은정성급기지질결합능력.결과현시,야생형apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano화apoA-Ⅰ(L195C)적α라선함량분별위54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,화54±1%,각충단백적α라선함량무현저성차이(P＞0.05).야생형apoA-Ⅰ적변성표준자유능(△G0 D)위10.5 kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)화apoA-Ⅰ Milano적△GoD비야생형저2.1 kJ/mol;이apoA-Ⅰ(K129C)적△GoD비야생형apoA-Ⅰ고1.6 kJ/mol.여야생형apoA-Ⅰ상비,apoA-Ⅰ(K129C)화apoA-Ⅰ(L195C)량개돌변체여지질결합능력명현하강(P＜0.05),이기타반광안산돌변체(포괄apo A-ⅠMilano)재지질결합동역학방면여야생형apoA-Ⅰ무명현차이.이상결과제시,불동위점발생적반광안산돌변대apoA-Ⅰ단체단백적α라선함량무명현영향,단대단백적이급결구은정성화지질결합능력영향불진상동.