复旦学报（自然科学版）
複旦學報（自然科學版）
복단학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2004年
6期
1035-1038
,共4页
杨婷婷%赵志安%张彦%宋大新
楊婷婷%趙誌安%張彥%宋大新
양정정%조지안%장언%송대신
人载脂蛋白ApoAⅠ%胞内表达质粒%毕赤氏酵母%蛋白质印迹
人載脂蛋白ApoAⅠ%胞內錶達質粒%畢赤氏酵母%蛋白質印跡
인재지단백ApoAⅠ%포내표체질립%필적씨효모%단백질인적
将PCR扩增得到的apoAⅠ基因片段插入胞内表达质粒pPIC3.5K,重组的pPIC3.5K-apoAⅠ用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选获得G418高抗性转化子,再通过PCR鉴定证实apoAⅠ基因已整合到染色体上.其转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,收集细胞裂解后,用SDS-PAGE与Western blotting检测,证明胞内有明显的rApoAⅠ表达,其分子质量与人血浆提取的ApoAⅠ相同.
將PCR擴增得到的apoAⅠ基因片段插入胞內錶達質粒pPIC3.5K,重組的pPIC3.5K-apoAⅠ用BglⅡ酶切後,轉化Pichia pastoris GS115菌株,篩選穫得G418高抗性轉化子,再通過PCR鑒定證實apoAⅠ基因已整閤到染色體上.其轉化子經搖瓶髮酵和甲醇誘導,收集細胞裂解後,用SDS-PAGE與Western blotting檢測,證明胞內有明顯的rApoAⅠ錶達,其分子質量與人血漿提取的ApoAⅠ相同.
장PCR확증득도적apoAⅠ기인편단삽입포내표체질립pPIC3.5K,중조적pPIC3.5K-apoAⅠ용BglⅡ매절후,전화Pichia pastoris GS115균주,사선획득G418고항성전화자,재통과PCR감정증실apoAⅠ기인이정합도염색체상.기전화자경요병발효화갑순유도,수집세포렬해후,용SDS-PAGE여Western blotting검측,증명포내유명현적rApoAⅠ표체,기분자질량여인혈장제취적ApoAⅠ상동.
