中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2004年
2期
45-50
,共6页
肖明贵%余龙江%刘智%程华%向福%周智德
肖明貴%餘龍江%劉智%程華%嚮福%週智德
초명귀%여룡강%류지%정화%향복%주지덕
曼地亚红豆杉%牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶%RT-PCR
曼地亞紅豆杉%牻牛兒基牻牛兒基焦燐痠閤成酶%RT-PCR
만지아홍두삼%방우인기방우인기초린산합성매%RT-PCR
从5年生曼地亚红豆杉(Taxus media)的当年生新鲜枝叶中提取分离出mRNA,然后根据已知植物的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因(GGPPS基因)DNA序列保守区设计特异简并引物.RT-PCR获得了一条大小约600bp的扩增谱带,回收该特异谱带并进行TA克隆,蓝白斑筛选,得到若干阳性克隆.经过质粒大小比较和PCR验证后,进行序列测定和同源性比较.发现该序列属于GGPP合成酶的片断,与Taxus canadensis (AAD 16018 1) 和Abies grandis (AAL 17614 2) 的GGPP合成酶相应区段的氨基酸序列一致性为98%和86%.蛋白质序列分析发现该序列含有一个特征的异戊二烯合成酶保守的结构域.进化树分析表明,曼地亚红豆杉GGPPS在进化上位于植物类,靠近古细菌类.曼地亚红豆杉GGPPS基因的克隆为研究红豆杉生产紫杉醇的分子机理和转基因植株的构建奠定了良好的基础.
從5年生曼地亞紅豆杉(Taxus media)的噹年生新鮮枝葉中提取分離齣mRNA,然後根據已知植物的牻牛兒基牻牛兒基焦燐痠閤成酶基因(GGPPS基因)DNA序列保守區設計特異簡併引物.RT-PCR穫得瞭一條大小約600bp的擴增譜帶,迴收該特異譜帶併進行TA剋隆,藍白斑篩選,得到若榦暘性剋隆.經過質粒大小比較和PCR驗證後,進行序列測定和同源性比較.髮現該序列屬于GGPP閤成酶的片斷,與Taxus canadensis (AAD 16018 1) 和Abies grandis (AAL 17614 2) 的GGPP閤成酶相應區段的氨基痠序列一緻性為98%和86%.蛋白質序列分析髮現該序列含有一箇特徵的異戊二烯閤成酶保守的結構域.進化樹分析錶明,曼地亞紅豆杉GGPPS在進化上位于植物類,靠近古細菌類.曼地亞紅豆杉GGPPS基因的剋隆為研究紅豆杉生產紫杉醇的分子機理和轉基因植株的構建奠定瞭良好的基礎.
종5년생만지아홍두삼(Taxus media)적당년생신선지협중제취분리출mRNA,연후근거이지식물적방우인기방우인기초린산합성매기인(GGPPS기인)DNA서렬보수구설계특이간병인물.RT-PCR획득료일조대소약600bp적확증보대,회수해특이보대병진행TA극륭,람백반사선,득도약간양성극륭.경과질립대소비교화PCR험증후,진행서렬측정화동원성비교.발현해서렬속우GGPP합성매적편단,여Taxus canadensis (AAD 16018 1) 화Abies grandis (AAL 17614 2) 적GGPP합성매상응구단적안기산서렬일치성위98%화86%.단백질서렬분석발현해서렬함유일개특정적이무이희합성매보수적결구역.진화수분석표명,만지아홍두삼GGPPS재진화상위우식물류,고근고세균류.만지아홍두삼GGPPS기인적극륭위연구홍두삼생산자삼순적분자궤리화전기인식주적구건전정료량호적기출.
