中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2000年
4期
452-457
,共6页
王瑶%吴玉水%兰风华%唐玉钗%朱忠勇
王瑤%吳玉水%蘭風華%唐玉釵%硃忠勇
왕요%오옥수%란풍화%당옥차%주충용
NADH-细胞色素b5还原酶%原核表达%GST融合蛋白%亲和层析
NADH-細胞色素b5還原酶%原覈錶達%GST融閤蛋白%親和層析
NADH-세포색소b5환원매%원핵표체%GST융합단백%친화층석
为了探讨NADH-细胞色素b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制,研究突变型(b5R)蛋白结构和功能的关系,用基因重组技术将野生型和突变型(C203Y)b5RcDNA克隆于pGEX-2T载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达.Western印迹鉴定所表达的蛋白为GST-b5R融合蛋白.应用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析,还原型谷胱甘肽洗脱得到纯化的GST-b5R和GST-b5RC203Y融合蛋白.比较GST-b5R和GST-b5RC203Y酶活性及稳定性,发现野生型和突变型的酶活性基本相同.但与野生型酶相比,突变型酶对热的稳定性较差,对胰蛋白酶更加敏感.结果提示,C203Y突变可引起蛋白质二级结构改变而导致酶的稳定性下降.
為瞭探討NADH-細胞色素b5還原酶基因突變引起遺傳性高鐵血紅蛋白血癥的分子病理機製,研究突變型(b5R)蛋白結構和功能的關繫,用基因重組技術將野生型和突變型(C203Y)b5RcDNA剋隆于pGEX-2T載體,在大腸桿菌BL21中誘導錶達.Western印跡鑒定所錶達的蛋白為GST-b5R融閤蛋白.應用穀胱甘肽-Sepharose 4B親和層析,還原型穀胱甘肽洗脫得到純化的GST-b5R和GST-b5RC203Y融閤蛋白.比較GST-b5R和GST-b5RC203Y酶活性及穩定性,髮現野生型和突變型的酶活性基本相同.但與野生型酶相比,突變型酶對熱的穩定性較差,對胰蛋白酶更加敏感.結果提示,C203Y突變可引起蛋白質二級結構改變而導緻酶的穩定性下降.
위료탐토NADH-세포색소b5환원매기인돌변인기유전성고철혈홍단백혈증적분자병리궤제,연구돌변형(b5R)단백결구화공능적관계,용기인중조기술장야생형화돌변형(C203Y)b5RcDNA극륭우pGEX-2T재체,재대장간균BL21중유도표체.Western인적감정소표체적단백위GST-b5R융합단백.응용곡광감태-Sepharose 4B친화층석,환원형곡광감태세탈득도순화적GST-b5R화GST-b5RC203Y융합단백.비교GST-b5R화GST-b5RC203Y매활성급은정성,발현야생형화돌변형적매활성기본상동.단여야생형매상비,돌변형매대열적은정성교차,대이단백매경가민감.결과제시,C203Y돌변가인기단백질이급결구개변이도치매적은정성하강.
