生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2003年
1期
89-94
,共6页
徐卉芳%张先恩%张治平%张用梅%A.E.G.CASS
徐卉芳%張先恩%張治平%張用梅%A.E.G.CASS
서훼방%장선은%장치평%장용매%A.E.G.CASS
定向进化%易错聚合酶链反应%大肠杆菌碱性磷酸酶%催化活力
定嚮進化%易錯聚閤酶鏈反應%大腸桿菌堿性燐痠酶%催化活力
정향진화%역착취합매련반응%대장간균감성린산매%최화활력
大肠杆菌碱性磷酸酶(E.coli alkaline phosphatase, EAP, EC 3.1.3.1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶. 采用易错聚合酶链反应(error prone PCR)的方法,在原有高活力突变株的基础上,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化,经两轮error prone PCR,获得催化活力较亲本D101S突变株提高3倍、较野生型酶提高35倍的进化酶4-186,并对该酶的催化动力学特征进行了分析. 进化酶基因的DNA测序表明4-186含两个有义氨基酸置换:K167R和S374C,二者既不位于底物结合位点,也不位于酶的金属离子结合位点.
大腸桿菌堿性燐痠酶(E.coli alkaline phosphatase, EAP, EC 3.1.3.1)是一箇非特異性二聚體燐痠單酯酶. 採用易錯聚閤酶鏈反應(error prone PCR)的方法,在原有高活力突變株的基礎上,對EAP遠離活性中心催化三聯體的區域進行定嚮進化,經兩輪error prone PCR,穫得催化活力較親本D101S突變株提高3倍、較野生型酶提高35倍的進化酶4-186,併對該酶的催化動力學特徵進行瞭分析. 進化酶基因的DNA測序錶明4-186含兩箇有義氨基痠置換:K167R和S374C,二者既不位于底物結閤位點,也不位于酶的金屬離子結閤位點.
대장간균감성린산매(E.coli alkaline phosphatase, EAP, EC 3.1.3.1)시일개비특이성이취체린산단지매. 채용역착취합매련반응(error prone PCR)적방법,재원유고활력돌변주적기출상,대EAP원리활성중심최화삼련체적구역진행정향진화,경량륜error prone PCR,획득최화활력교친본D101S돌변주제고3배、교야생형매제고35배적진화매4-186,병대해매적최화동역학특정진행료분석. 진화매기인적DNA측서표명4-186함량개유의안기산치환:K167R화S374C,이자기불위우저물결합위점,야불위우매적금속리자결합위점.
