中国肿瘤临床
中國腫瘤臨床
중국종류림상
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY
2002年
12期
859-862
,共4页
李殿俊%杨秋霞%李大林%曲昌发%郗雪艳%王辉%刘莉
李殿俊%楊鞦霞%李大林%麯昌髮%郗雪豔%王輝%劉莉
리전준%양추하%리대림%곡창발%치설염%왕휘%류리
抑制性消减杂交%肺腺癌%同源正常组织%cDNA文库
抑製性消減雜交%肺腺癌%同源正常組織%cDNA文庫
억제성소감잡교%폐선암%동원정상조직%cDNA문고
目的:分离肺腺癌及同源正常组织中的未知特异性基因片段,并建立相应的cDNA文库,为研究肿瘤基因疫苗打下良好的基础方法:从肺腺癌及同源正常组织中分别提取总RNA,磁珠分离mRNA并逆转录为dsDNA,经RasI消化酶切将Adaptor-1和Adaptor-2R适配子分别与肺腺癌肖化后的cDNA连接(作为tester),再与正常同源组织(作为driver)进行正向杂交和逆向杂交具有上述2种不同适配子的杂交后cDNA分子,通过初次PCR和巢式PCR富集未知的cDNA片段,此PCR产物与TA克隆载体pGEM连接,转化Top10大肠杆菌,获得白色菌落并经菌液PCR扩增出未知基因片段结果:经正向抑制性消减杂交和逆向抑制性肖减杂交分别获取了肺腺癌组织及同源正常组织的特异性cDNA文库.结论:抑制性消减杂交是一种快速、方便、有效的建立cDNA文库的方法.
目的:分離肺腺癌及同源正常組織中的未知特異性基因片段,併建立相應的cDNA文庫,為研究腫瘤基因疫苗打下良好的基礎方法:從肺腺癌及同源正常組織中分彆提取總RNA,磁珠分離mRNA併逆轉錄為dsDNA,經RasI消化酶切將Adaptor-1和Adaptor-2R適配子分彆與肺腺癌肖化後的cDNA連接(作為tester),再與正常同源組織(作為driver)進行正嚮雜交和逆嚮雜交具有上述2種不同適配子的雜交後cDNA分子,通過初次PCR和巢式PCR富集未知的cDNA片段,此PCR產物與TA剋隆載體pGEM連接,轉化Top10大腸桿菌,穫得白色菌落併經菌液PCR擴增齣未知基因片段結果:經正嚮抑製性消減雜交和逆嚮抑製性肖減雜交分彆穫取瞭肺腺癌組織及同源正常組織的特異性cDNA文庫.結論:抑製性消減雜交是一種快速、方便、有效的建立cDNA文庫的方法.
목적:분리폐선암급동원정상조직중적미지특이성기인편단,병건립상응적cDNA문고,위연구종류기인역묘타하량호적기출방법:종폐선암급동원정상조직중분별제취총RNA,자주분리mRNA병역전록위dsDNA,경RasI소화매절장Adaptor-1화Adaptor-2R괄배자분별여폐선암초화후적cDNA련접(작위tester),재여정상동원조직(작위driver)진행정향잡교화역향잡교구유상술2충불동괄배자적잡교후cDNA분자,통과초차PCR화소식PCR부집미지적cDNA편단,차PCR산물여TA극륭재체pGEM련접,전화Top10대장간균,획득백색균락병경균액PCR확증출미지기인편단결과:경정향억제성소감잡교화역향억제성초감잡교분별획취료폐선암조직급동원정상조직적특이성cDNA문고.결론:억제성소감잡교시일충쾌속、방편、유효적건립cDNA문고적방법.
