江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2002年
10期
732-734
,共3页
王玮%傅建新%陈子兴%岑建农%李建勇%薛永权
王瑋%傅建新%陳子興%岑建農%李建勇%薛永權
왕위%부건신%진자흥%잠건농%리건용%설영권
MDR1基因%反义RNA%逆转录病毒%基因转移%基因表达
MDR1基因%反義RNA%逆轉錄病毒%基因轉移%基因錶達
MDR1기인%반의RNA%역전록병독%기인전이%기인표체
目的建立逆转录病毒介导的反义多药耐药MDR1基因转移体系,探讨反义RNA封闭白血病耐药细胞中MDR1基因表达的能力.方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从白血病耐药细胞株HL-60/VCR mRNA中扩增出含有启始密码子ATG的524bp的MDR1基因cDNA片段,反向插入逆转录病毒载体pLXSN,通过脂质体转和乒乓感染单、双噬型包装细胞GP+E86和GP+envAM12,以双嗜型病毒上清感染白血病耐药细胞K562/MDR,半定量RT-PCR和流式细胞术(FCM)分析MDR1基因转录和P-糖蛋白(P-gp)的表达.结果酶切、PCR和DNA测序证实反义MDR1基因重组逆转录病毒载体pLASSN构建正确;双嗜型病毒生产细胞的滴度为1.3×105CFU/ml,巢式PCR和补救分析均未检测到辅助病毒存在;PCR和RT-PCR分析证实病毒生产细胞和反义修饰的耐药细胞K562MDR/LASSN中均有反义MDR1基因整合和MDR1基因反义RNA的转录;FCM分析K562MDR/LASSN细胞中P-gp表达强度和表达率比对照细胞均有明显下降.结论逆转录病毒介导的反义基因转移系统安全有效,可用于肿瘤耐药逆转的研究.
目的建立逆轉錄病毒介導的反義多藥耐藥MDR1基因轉移體繫,探討反義RNA封閉白血病耐藥細胞中MDR1基因錶達的能力.方法逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法從白血病耐藥細胞株HL-60/VCR mRNA中擴增齣含有啟始密碼子ATG的524bp的MDR1基因cDNA片段,反嚮插入逆轉錄病毒載體pLXSN,通過脂質體轉和乒乓感染單、雙噬型包裝細胞GP+E86和GP+envAM12,以雙嗜型病毒上清感染白血病耐藥細胞K562/MDR,半定量RT-PCR和流式細胞術(FCM)分析MDR1基因轉錄和P-糖蛋白(P-gp)的錶達.結果酶切、PCR和DNA測序證實反義MDR1基因重組逆轉錄病毒載體pLASSN構建正確;雙嗜型病毒生產細胞的滴度為1.3×105CFU/ml,巢式PCR和補救分析均未檢測到輔助病毒存在;PCR和RT-PCR分析證實病毒生產細胞和反義脩飾的耐藥細胞K562MDR/LASSN中均有反義MDR1基因整閤和MDR1基因反義RNA的轉錄;FCM分析K562MDR/LASSN細胞中P-gp錶達彊度和錶達率比對照細胞均有明顯下降.結論逆轉錄病毒介導的反義基因轉移繫統安全有效,可用于腫瘤耐藥逆轉的研究.
목적건립역전록병독개도적반의다약내약MDR1기인전이체계,탐토반의RNA봉폐백혈병내약세포중MDR1기인표체적능력.방법역전록-취합매련반응(RT-PCR)법종백혈병내약세포주HL-60/VCR mRNA중확증출함유계시밀마자ATG적524bp적MDR1기인cDNA편단,반향삽입역전록병독재체pLXSN,통과지질체전화핑퐁감염단、쌍서형포장세포GP+E86화GP+envAM12,이쌍기형병독상청감염백혈병내약세포K562/MDR,반정량RT-PCR화류식세포술(FCM)분석MDR1기인전록화P-당단백(P-gp)적표체.결과매절、PCR화DNA측서증실반의MDR1기인중조역전록병독재체pLASSN구건정학;쌍기형병독생산세포적적도위1.3×105CFU/ml,소식PCR화보구분석균미검측도보조병독존재;PCR화RT-PCR분석증실병독생산세포화반의수식적내약세포K562MDR/LASSN중균유반의MDR1기인정합화MDR1기인반의RNA적전록;FCM분석K562MDR/LASSN세포중P-gp표체강도화표체솔비대조세포균유명현하강.결론역전록병독개도적반의기인전이계통안전유효,가용우종류내약역전적연구.
