第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2002年
6期
716-718
,共3页
郑育声%谢琪璇%潘善培%芦春斌%肖銮娟
鄭育聲%謝琪璇%潘善培%蘆春斌%肖鑾娟
정육성%사기선%반선배%호춘빈%초란연
人巨细胞病毒%重组PCR%质粒pPIC9K
人巨細胞病毒%重組PCR%質粒pPIC9K
인거세포병독%중조PCR%질립pPIC9K
目的用基因工程技术克隆人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段-gp52C末端和pp150C末端的DNA序列,插入pPIC9K质粒,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒.方法根据人巨细胞病毒糖蛋白gp52和磷酸蛋白pp150C末端的cDNA序列,设计出2对引物.利用PCR的方法,以病毒培养液上清为模板,进行二轮PCR扩增,把两个目的基因串联在一起,将所得的DNA片段经 EcoRⅠ和Not Ⅰ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接,然后导入大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子,并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子.结果从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因,PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符.结论重组表达质粒成功地克隆了目的基因片段.
目的用基因工程技術剋隆人巨細胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)中抗原性較彊的蛋白片段-gp52C末耑和pp150C末耑的DNA序列,插入pPIC9K質粒,構建適于酵母錶達繫統的重組錶達質粒.方法根據人巨細胞病毒糖蛋白gp52和燐痠蛋白pp150C末耑的cDNA序列,設計齣2對引物.利用PCR的方法,以病毒培養液上清為模闆,進行二輪PCR擴增,把兩箇目的基因串聯在一起,將所得的DNA片段經 EcoRⅠ和Not Ⅰ雙酶切後用T4連接酶與pPIC9K質粒進行連接,然後導入大腸桿菌DH5α,篩選齣暘性轉化子,併用PCR和雙酶切鑒定暘性重組子.結果從人巨細胞病毒培養液上清中擴增齣目的基因,PCR反應和雙酶切鑒定結果與預期相符.結論重組錶達質粒成功地剋隆瞭目的基因片段.
목적용기인공정기술극륭인거세포병독(Human cytomegalovirus,HCMV)중항원성교강적단백편단-gp52C말단화pp150C말단적DNA서렬,삽입pPIC9K질립,구건괄우효모표체계통적중조표체질립.방법근거인거세포병독당단백gp52화린산단백pp150C말단적cDNA서렬,설계출2대인물.이용PCR적방법,이병독배양액상청위모판,진행이륜PCR확증,파량개목적기인천련재일기,장소득적DNA편단경 EcoRⅠ화Not Ⅰ쌍매절후용T4련접매여pPIC9K질립진행련접,연후도입대장간균DH5α,사선출양성전화자,병용PCR화쌍매절감정양성중조자.결과종인거세포병독배양액상청중확증출목적기인,PCR반응화쌍매절감정결과여예기상부.결론중조표체질립성공지극륭료목적기인편단.
