CAJ | 학술논문

目的应用限制性显示PCR(restriction displaypolymerase chain reaction,RD-PCR)技术分离克隆SH-SY5Y细胞的基因片段.方法从SH-SY5Y细胞中分离提纯mRNA,然后以Oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3A Ⅰ酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物扩增后,与载体pMD18相连,克隆、测序.结果分离出一段cDNA,经Blast分析,发现与基因组17号染色体的一段序列具有高度的相似性,运用GenScan分析这段DNA序列,提示这段表达序列标签(expressed sequencetag,EST)可能是一个未知基因的一部分.结论 RD-PCR技术是一种简便、有效的分离克隆基因片段的方法,运用生物信息学对EST的染色体定位以及下一步的实验可能具有一定的指导意义.
목적응용한제성현시PCR(restriction displaypolymerase chain reaction,RD-PCR)기술분리극륭SH-SY5Y세포적기인편단.방법종SH-SY5Y세포중분리제순mRNA,연후이Oligo(dT18)위묘정인물반전록생성단련cDNA,재이차위모판합성DNA적제이조련;장쌍련DNA경Sau3A Ⅰ매절지후,접상접두,경통용인물화선택성인물확증후,여재체pMD18상련,극륭、측서.결과분리출일단cDNA,경Blast분석,발현여기인조17호염색체적일단서렬구유고도적상사성,운용GenScan분석저단DNA서렬,제시저단표체서렬표첨(expressed sequencetag,EST)가능시일개미지기인적일부분.결론 RD-PCR기술시일충간편、유효적분리극륭기인편단적방법,운용생물신식학대EST적염색체정위이급하일보적실험가능구유일정적지도의의.