中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2002年
3期
299-302
,共4页
袁栎%刘丽%赵显玲%王烨%曹颖
袁櫟%劉麗%趙顯玲%王燁%曹穎
원력%류려%조현령%왕엽%조영
肿瘤坏死因子受体%表达%纯化%活性
腫瘤壞死因子受體%錶達%純化%活性
종류배사인자수체%표체%순화%활성
将编码可溶性人TNFR75(shTNFR75)的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞.甲醇诱导的pPICZαA-shTNFR75/GS115重组酵母工程细胞培养上清,经CNBr活化的TNF-Sepharose4B亲和层析柱纯化,纯化产物纯度为92%;经Westem印迹分析,可被TNFR75单克隆抗体特异性识别,分子量约为31kD;受体配体结合试验,shTNFR75纯化产物与rhTNFα和rhTNFβ的结合能力与其阳性对照基本相同;中和试验显示,该shTNFR75可完全阻断TNF对L929细胞的细胞毒活性.表明酵母系统分泌表达的shTNFR75产物具有良好的结合TNF的能力.
將編碼可溶性人TNFR75(shTNFR75)的cDNA與酵母整閤載體pPICZαA重組,構建的重組質粒線性化後轉染酵母細胞GS 115,穫得瞭shTNFR75在酵母細胞中遺傳性穩定錶達酵母工程細胞.甲醇誘導的pPICZαA-shTNFR75/GS115重組酵母工程細胞培養上清,經CNBr活化的TNF-Sepharose4B親和層析柱純化,純化產物純度為92%;經Westem印跡分析,可被TNFR75單剋隆抗體特異性識彆,分子量約為31kD;受體配體結閤試驗,shTNFR75純化產物與rhTNFα和rhTNFβ的結閤能力與其暘性對照基本相同;中和試驗顯示,該shTNFR75可完全阻斷TNF對L929細胞的細胞毒活性.錶明酵母繫統分泌錶達的shTNFR75產物具有良好的結閤TNF的能力.
장편마가용성인TNFR75(shTNFR75)적cDNA여효모정합재체pPICZαA중조,구건적중조질립선성화후전염효모세포GS 115,획득료shTNFR75재효모세포중유전성은정표체효모공정세포.갑순유도적pPICZαA-shTNFR75/GS115중조효모공정세포배양상청,경CNBr활화적TNF-Sepharose4B친화층석주순화,순화산물순도위92%;경Westem인적분석,가피TNFR75단극륭항체특이성식별,분자량약위31kD;수체배체결합시험,shTNFR75순화산물여rhTNFα화rhTNFβ적결합능력여기양성대조기본상동;중화시험현시,해shTNFR75가완전조단TNF대L929세포적세포독활성.표명효모계통분비표체적shTNFR75산물구유량호적결합TNF적능력.
