生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
1期
63-68
,共6页
何向远%金城%张树政%杨寿钧
何嚮遠%金城%張樹政%楊壽鈞
하향원%금성%장수정%양수균
耐热β-糖苷酶%非解朊栖热菌HG102%耐热性研究
耐熱β-糖苷酶%非解朊棲熱菌HG102%耐熱性研究
내열β-당감매%비해원서열균HG102%내열성연구
从非解朊栖热菌HG102(Thermus nonproteolyticus)染色体文库中,筛选得到耐热β-糖苷酶(Th-gly)基因.该基因位于重组质粒2.6kb HindⅢ插入片段上;并在E.coli中表达,酶比活力提高17倍.经序列测定,该基因1311bp,编码436个氨基酸,前端与部分糖透性酶基因紧密相连,G+G含量为71%,有明显的RBS序列,启动子序列不明显.经序列同源性比较,其氨基酸序列属糖苷水解酶家族1,有-N-E-P-和-T-E-N-保守序列,Glu164和Glu338推测是催化活性中心.其氨基酸组成中,疏水氨基酸含量较高(Ala 12.8%、Leu 10.9%),Arg(9.6%)、Glu(9.44%)和Pro(8.0%)含量显著较高.理论预测二级结构中,α-螺旋占41.4%,β-折叠占16.2%,β-转角占14.4%,并有大量的Pro位于β-转角的第二位.疏水作用、盐键、α-螺旋和Pro对Tn-gly的突出热稳定性有重要贡献.经系统进化树分析发现,β-糖苷酶在物种进化中比较保守.
從非解朊棲熱菌HG102(Thermus nonproteolyticus)染色體文庫中,篩選得到耐熱β-糖苷酶(Th-gly)基因.該基因位于重組質粒2.6kb HindⅢ插入片段上;併在E.coli中錶達,酶比活力提高17倍.經序列測定,該基因1311bp,編碼436箇氨基痠,前耑與部分糖透性酶基因緊密相連,G+G含量為71%,有明顯的RBS序列,啟動子序列不明顯.經序列同源性比較,其氨基痠序列屬糖苷水解酶傢族1,有-N-E-P-和-T-E-N-保守序列,Glu164和Glu338推測是催化活性中心.其氨基痠組成中,疏水氨基痠含量較高(Ala 12.8%、Leu 10.9%),Arg(9.6%)、Glu(9.44%)和Pro(8.0%)含量顯著較高.理論預測二級結構中,α-螺鏇佔41.4%,β-摺疊佔16.2%,β-轉角佔14.4%,併有大量的Pro位于β-轉角的第二位.疏水作用、鹽鍵、α-螺鏇和Pro對Tn-gly的突齣熱穩定性有重要貢獻.經繫統進化樹分析髮現,β-糖苷酶在物種進化中比較保守.
종비해원서열균HG102(Thermus nonproteolyticus)염색체문고중,사선득도내열β-당감매(Th-gly)기인.해기인위우중조질립2.6kb HindⅢ삽입편단상;병재E.coli중표체,매비활력제고17배.경서렬측정,해기인1311bp,편마436개안기산,전단여부분당투성매기인긴밀상련,G+G함량위71%,유명현적RBS서렬,계동자서렬불명현.경서렬동원성비교,기안기산서렬속당감수해매가족1,유-N-E-P-화-T-E-N-보수서렬,Glu164화Glu338추측시최화활성중심.기안기산조성중,소수안기산함량교고(Ala 12.8%、Leu 10.9%),Arg(9.6%)、Glu(9.44%)화Pro(8.0%)함량현저교고.이론예측이급결구중,α-라선점41.4%,β-절첩점16.2%,β-전각점14.4%,병유대량적Pro위우β-전각적제이위.소수작용、염건、α-라선화Pro대Tn-gly적돌출열은정성유중요공헌.경계통진화수분석발현,β-당감매재물충진화중비교보수.
