农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2007年
1期
153-156
,共4页
雷凯健%卢维维%洪玉枝%刘子铎
雷凱健%盧維維%洪玉枝%劉子鐸
뢰개건%로유유%홍옥지%류자탁
草甘膦N-乙酰转移酶%克隆%酶活测定
草甘膦N-乙酰轉移酶%剋隆%酶活測定
초감련N-을선전이매%극륭%매활측정
实验通过PCR程序从提取的土壤总DNA中扩增出草甘膦N-乙酰转移酶基因(gat),酶解后插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pGEX-6p-1,获得克隆株.基因测序表明,与GenBank中的AX543338核苷酸序列有99.3%的同源性.将GAT经亲和层析纯化后,对该酶的酶学性质进行了初步分析,结果表明,该酶的最适温度为30℃,最适反应pH 7.检测了6种金属离子对酶活性的影响,发现单价离子K+和Na+对GAT的激活作用高于双价离子Mg2+和Mn2+,其中Na+的激活作用最强,而Ca2+有明显的抑制作用.
實驗通過PCR程序從提取的土壤總DNA中擴增齣草甘膦N-乙酰轉移酶基因(gat),酶解後插入大腸桿菌(Escherichia coli)錶達載體pGEX-6p-1,穫得剋隆株.基因測序錶明,與GenBank中的AX543338覈苷痠序列有99.3%的同源性.將GAT經親和層析純化後,對該酶的酶學性質進行瞭初步分析,結果錶明,該酶的最適溫度為30℃,最適反應pH 7.檢測瞭6種金屬離子對酶活性的影響,髮現單價離子K+和Na+對GAT的激活作用高于雙價離子Mg2+和Mn2+,其中Na+的激活作用最彊,而Ca2+有明顯的抑製作用.
실험통과PCR정서종제취적토양총DNA중확증출초감련N-을선전이매기인(gat),매해후삽입대장간균(Escherichia coli)표체재체pGEX-6p-1,획득극륭주.기인측서표명,여GenBank중적AX543338핵감산서렬유99.3%적동원성.장GAT경친화층석순화후,대해매적매학성질진행료초보분석,결과표명,해매적최괄온도위30℃,최괄반응pH 7.검측료6충금속리자대매활성적영향,발현단개리자K+화Na+대GAT적격활작용고우쌍개리자Mg2+화Mn2+,기중Na+적격활작용최강,이Ca2+유명현적억제작용.
