生物医学工程与临床
生物醫學工程與臨床
생물의학공정여림상
BIOMEDICAL ENGINEERING AND CLINICAL MEDICINE
2008年
3期
235-239,封2
,共6页
李卫华%缪晓辉%戚中田%朱诗应%赵克开
李衛華%繆曉輝%慼中田%硃詩應%趙剋開
리위화%무효휘%척중전%주시응%조극개
肝癌细胞%乙型肝炎病毒%X蛋白%细胞周期%细胞凋亡
肝癌細胞%乙型肝炎病毒%X蛋白%細胞週期%細胞凋亡
간암세포%을형간염병독%X단백%세포주기%세포조망
目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肝癌细胞恶性程度的影响.方法 构建携带HBVx基因真核表达载体pcDNA3/HBx,以脂质体介导转染HepG2肝癌细胞,建立可稳定表达HBx的肝癌细胞系HepG2-HBx细胞,同时设空载体pcDNA,转染细胞HepG2-pcDNA,及未转染HepG2细胞为对照组.PCR法扩增Neo基因检测插入的质粒DNA片段,免疫荧光检测HBx的表达.通过生长曲线测定、平板克隆形成实验、MTT比色实验、Hoechst33342核形态学染色观察及流式细胞仪测定,了解稳定转染细胞的生物学行为变化.结果 与对照组相比,转染pcDNA3/HBx的HepG2-HBx细胞生长速度加快,其倍增时间缩短(28 h对32.5 h或34 h,P＜0.05),克隆形成率增加[(10.12±0.23)%对(5.33.±0.19)%或(5.19.±0.28)%,P＜0.05],细胞周期分析显示由G0/G1期-S期的进程明显加快.细胞凋亡检测显示HepG2-HBx细胞可抵抗放线菌素D(AetD)诱导的凋亡作用.结论 HBx可提高肝癌细胞的增殖活性,并增强肝癌细胞的抗凋亡能力,增加了肝癌细胞的恶性表型.
目的 探討乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)對肝癌細胞噁性程度的影響.方法 構建攜帶HBVx基因真覈錶達載體pcDNA3/HBx,以脂質體介導轉染HepG2肝癌細胞,建立可穩定錶達HBx的肝癌細胞繫HepG2-HBx細胞,同時設空載體pcDNA,轉染細胞HepG2-pcDNA,及未轉染HepG2細胞為對照組.PCR法擴增Neo基因檢測插入的質粒DNA片段,免疫熒光檢測HBx的錶達.通過生長麯線測定、平闆剋隆形成實驗、MTT比色實驗、Hoechst33342覈形態學染色觀察及流式細胞儀測定,瞭解穩定轉染細胞的生物學行為變化.結果 與對照組相比,轉染pcDNA3/HBx的HepG2-HBx細胞生長速度加快,其倍增時間縮短(28 h對32.5 h或34 h,P＜0.05),剋隆形成率增加[(10.12±0.23)%對(5.33.±0.19)%或(5.19.±0.28)%,P＜0.05],細胞週期分析顯示由G0/G1期-S期的進程明顯加快.細胞凋亡檢測顯示HepG2-HBx細胞可牴抗放線菌素D(AetD)誘導的凋亡作用.結論 HBx可提高肝癌細胞的增殖活性,併增彊肝癌細胞的抗凋亡能力,增加瞭肝癌細胞的噁性錶型.
목적 탐토을형간염병독X단백(hepatitis B virus X protein,HBx)대간암세포악성정도적영향.방법 구건휴대HBVx기인진핵표체재체pcDNA3/HBx,이지질체개도전염HepG2간암세포,건립가은정표체HBx적간암세포계HepG2-HBx세포,동시설공재체pcDNA,전염세포HepG2-pcDNA,급미전염HepG2세포위대조조.PCR법확증Neo기인검측삽입적질립DNA편단,면역형광검측HBx적표체.통과생장곡선측정、평판극륭형성실험、MTT비색실험、Hoechst33342핵형태학염색관찰급류식세포의측정,료해은정전염세포적생물학행위변화.결과 여대조조상비,전염pcDNA3/HBx적HepG2-HBx세포생장속도가쾌,기배증시간축단(28 h대32.5 h혹34 h,P＜0.05),극륭형성솔증가[(10.12±0.23)%대(5.33.±0.19)%혹(5.19.±0.28)%,P＜0.05],세포주기분석현시유G0/G1기-S기적진정명현가쾌.세포조망검측현시HepG2-HBx세포가저항방선균소D(AetD)유도적조망작용.결론 HBx가제고간암세포적증식활성,병증강간암세포적항조망능력,증가료간암세포적악성표형.
