广西农业生物科学
廣西農業生物科學
엄서농업생물과학
JOURNAL OF GUANGXI AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL SCIENCE
2008年
3期
218-222
,共5页
覃艳%何勇强%农友业%姜伯乐%吴子恺
覃豔%何勇彊%農友業%薑伯樂%吳子愷
담염%하용강%농우업%강백악%오자개
植酸酶基因%根癌农杆菌%木薯%转基因
植痠酶基因%根癌農桿菌%木藷%轉基因
식산매기인%근암농간균%목서%전기인
将米曲霉植酸酶基因phyA克隆于植物表达载体pBI121的CaMV35S启动子(P35S)下游,构建了含有P35S-phyA-TNOS表达盒的重组质粒pBI-phyA,并用电脉冲法将其导入大肠杆菌中.通过三亲接合将pBI-phyA质粒由大肠杆菌导入根癌农杆菌LBA4404菌株,获得带有phyA基因的根癌农杆菌工程菌株LBA4404/pBI-phyA.用LBA4404/pBI-phyA转化木薯外植体652个,在含100 mg/L卡那霉素和250 mg/L 氨苄青霉素的MS分化培养基上诱导分化芽,获得24株抗卡那霉素转化苗.以转化苗和未转化植株的总DNA为模板,用phyA基因的同源序列为引物,进行聚合酶链式反应(PCR),结果表明9株转化苗的PCR结果为阳性,初步证明目的基因phyA已经转入木薯中.
將米麯黴植痠酶基因phyA剋隆于植物錶達載體pBI121的CaMV35S啟動子(P35S)下遊,構建瞭含有P35S-phyA-TNOS錶達盒的重組質粒pBI-phyA,併用電脈遲法將其導入大腸桿菌中.通過三親接閤將pBI-phyA質粒由大腸桿菌導入根癌農桿菌LBA4404菌株,穫得帶有phyA基因的根癌農桿菌工程菌株LBA4404/pBI-phyA.用LBA4404/pBI-phyA轉化木藷外植體652箇,在含100 mg/L卡那黴素和250 mg/L 氨芐青黴素的MS分化培養基上誘導分化芽,穫得24株抗卡那黴素轉化苗.以轉化苗和未轉化植株的總DNA為模闆,用phyA基因的同源序列為引物,進行聚閤酶鏈式反應(PCR),結果錶明9株轉化苗的PCR結果為暘性,初步證明目的基因phyA已經轉入木藷中.
장미곡매식산매기인phyA극륭우식물표체재체pBI121적CaMV35S계동자(P35S)하유,구건료함유P35S-phyA-TNOS표체합적중조질립pBI-phyA,병용전맥충법장기도입대장간균중.통과삼친접합장pBI-phyA질립유대장간균도입근암농간균LBA4404균주,획득대유phyA기인적근암농간균공정균주LBA4404/pBI-phyA.용LBA4404/pBI-phyA전화목서외식체652개,재함100 mg/L잡나매소화250 mg/L 안변청매소적MS분화배양기상유도분화아,획득24주항잡나매소전화묘.이전화묘화미전화식주적총DNA위모판,용phyA기인적동원서렬위인물,진행취합매련식반응(PCR),결과표명9주전화묘적PCR결과위양성,초보증명목적기인phyA이경전입목서중.
