浙江大学学报(医学版)
浙江大學學報(醫學版)
절강대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
3期
264-271
,共8页
MAP30%苦瓜%植物蛋白质类%核糖体蛋白质类%遗传学技术%重组,遗传
MAP30%苦瓜%植物蛋白質類%覈糖體蛋白質類%遺傳學技術%重組,遺傳
MAP30%고과%식물단백질류%핵당체단백질류%유전학기술%중조,유전
目的:从苦瓜籽中克隆HIV-1整合酶抑制剂MAP30,构建其表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,用于MAP30在细胞内的转运机理研究.方法:从成熟苦瓜种子中提取基因组DNA,通过PCR的方法扩增出MAP30基因的全长,并将其克隆进入原核表达载体pET-30a,转化Eoli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和纯化,梯度咪唑洗脱.MTT法分析生物学活性.结果:测序发现插入的MAP30基因序列正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确,且MAP30主要以可溶形式表达.MTT法测定重组的MAP30具有生物学活性,且对肿瘤细胞的毒性远远大于对正常细胞的毒性.结论:本研究成功地构建了MAP30的表达系统,并实现了MAP30的可溶性表达,表达后的蛋白具有生物学活性,可用于抗体-毒素的肿瘤靶向药物的合成.
目的:從苦瓜籽中剋隆HIV-1整閤酶抑製劑MAP30,構建其錶達載體,併在大腸桿菌中進行錶達,用于MAP30在細胞內的轉運機理研究.方法:從成熟苦瓜種子中提取基因組DNA,通過PCR的方法擴增齣MAP30基因的全長,併將其剋隆進入原覈錶達載體pET-30a,轉化Eoli.BL21(DE3),IPTG誘導錶達,Ni-NTA親和純化,梯度咪唑洗脫.MTT法分析生物學活性.結果:測序髮現插入的MAP30基因序列正確,SDS-PAGE鑒定錶達產物分子量正確,且MAP30主要以可溶形式錶達.MTT法測定重組的MAP30具有生物學活性,且對腫瘤細胞的毒性遠遠大于對正常細胞的毒性.結論:本研究成功地構建瞭MAP30的錶達繫統,併實現瞭MAP30的可溶性錶達,錶達後的蛋白具有生物學活性,可用于抗體-毒素的腫瘤靶嚮藥物的閤成.
목적:종고과자중극륭HIV-1정합매억제제MAP30,구건기표체재체,병재대장간균중진행표체,용우MAP30재세포내적전운궤리연구.방법:종성숙고과충자중제취기인조DNA,통과PCR적방법확증출MAP30기인적전장,병장기극륭진입원핵표체재체pET-30a,전화Eoli.BL21(DE3),IPTG유도표체,Ni-NTA친화순화,제도미서세탈.MTT법분석생물학활성.결과:측서발현삽입적MAP30기인서렬정학,SDS-PAGE감정표체산물분자량정학,차MAP30주요이가용형식표체.MTT법측정중조적MAP30구유생물학활성,차대종류세포적독성원원대우대정상세포적독성.결론:본연구성공지구건료MAP30적표체계통,병실현료MAP30적가용성표체,표체후적단백구유생물학활성,가용우항체-독소적종류파향약물적합성.
