福建农业学报
福建農業學報
복건농업학보
FUJIAN JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
8期
787-791
,共5页
李友娟%葛均青%宋铁英%林天龙
李友娟%葛均青%宋鐵英%林天龍
리우연%갈균청%송철영%림천룡
鳗鲡疱疹病毒%ORF95%基因克隆%原核表达
鰻鱺皰疹病毒%ORF95%基因剋隆%原覈錶達
만려포진병독%ORF95%기인극륭%원핵표체
鳗鲡疱疹病毒(Anguillae herpesvirus,AngHV)是淡水鳗鲡的主要病毒性疾病病原之一.根据鳗鲡疱疹病毒(AngHV-1)的基因组序列(GenBank:NC-013668)设计引物,扩增鳗鲡疱疹病毒福建株(AngHV-FJ)ORF95基因的开放阅读框序列,克隆至pMD19-T载体；经限制性内切酶酶切和测序鉴定,进一步将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建了表达质粒32a-ORF95,将其转化表达菌株BL21 (DE3),经IPTG诱导,实现了ORF95在大肠杆菌中的高效表达.在0.1 mmol·L-1 IPTG、23℃诱导14 h的条件下,可溶性ORF95蛋白的表达量较高,经镍柱纯化获得了高纯度的融合蛋白.
鰻鱺皰疹病毒(Anguillae herpesvirus,AngHV)是淡水鰻鱺的主要病毒性疾病病原之一.根據鰻鱺皰疹病毒(AngHV-1)的基因組序列(GenBank:NC-013668)設計引物,擴增鰻鱺皰疹病毒福建株(AngHV-FJ)ORF95基因的開放閱讀框序列,剋隆至pMD19-T載體；經限製性內切酶酶切和測序鑒定,進一步將其剋隆至原覈錶達載體pET-32a,構建瞭錶達質粒32a-ORF95,將其轉化錶達菌株BL21 (DE3),經IPTG誘導,實現瞭ORF95在大腸桿菌中的高效錶達.在0.1 mmol·L-1 IPTG、23℃誘導14 h的條件下,可溶性ORF95蛋白的錶達量較高,經鎳柱純化穫得瞭高純度的融閤蛋白.
만려포진병독(Anguillae herpesvirus,AngHV)시담수만려적주요병독성질병병원지일.근거만려포진병독(AngHV-1)적기인조서렬(GenBank:NC-013668)설계인물,확증만려포진병독복건주(AngHV-FJ)ORF95기인적개방열독광서렬,극륭지pMD19-T재체；경한제성내절매매절화측서감정,진일보장기극륭지원핵표체재체pET-32a,구건료표체질립32a-ORF95,장기전화표체균주BL21 (DE3),경IPTG유도,실현료ORF95재대장간균중적고효표체.재0.1 mmol·L-1 IPTG、23℃유도14 h적조건하,가용성ORF95단백적표체량교고,경얼주순화획득료고순도적융합단백.
