生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2003年
3期
453-460
,共8页
谢江碧%郭振泉%翁宁%王洪涛%江冠群%茹炳根
謝江碧%郭振泉%翁寧%王洪濤%江冠群%茹炳根
사강벽%곽진천%옹저%왕홍도%강관군%여병근
凋亡相关丝氨酸蛋白酶1%细胞凋亡%丝氨酸蛋白酶%纯化%糖蛋白%纤溶酶%纤溶酶原激活酶
凋亡相關絲氨痠蛋白酶1%細胞凋亡%絲氨痠蛋白酶%純化%糖蛋白%纖溶酶%纖溶酶原激活酶
조망상관사안산단백매1%세포조망%사안산단백매%순화%당단백%섬용매%섬용매원격활매
通过多级柱层析,从赤子爱胜蚓抽提物(一组抗肿瘤活性蛋白成分)中纯化得到凋亡相关丝氨酸蛋白酶1(apoptosis-related serine protease 1, ARSP1),SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得其表观分子质量为28 ku.ARSP1非变性PAGE图谱为相连的多条带,质谱图为多头峰,MALDI-TOF-MS测得各主峰相对分子质量为24 645,25 052和25 281,等电聚焦电泳测得等电点pI＜3.8.测得ARSP1 N端25个氨基酸序列为:I(V)IGGT(S)N(D)ASPGEFPWQLSQTRGGSHS,N端序列比较结果显示其与丝氨酸蛋白酶类高度同源.体外实验中,不仅通过凋亡细胞的相差显微观察验证了ARSP1的细胞杀伤活性,而且进一步通过荧光抗体技术对其直接杀伤细胞活性进行了定位研究.Schiffs试剂糖蛋白染色法鉴定ARSP1为糖蛋白(或糖肽),纤维蛋白平板法测得ARSP1同时具有纤溶酶和纤溶酶原激活酶活性,进一步通过苯甲磺酰氟(PMSF)对其纤溶酶活性的抑制实验,证明属于丝氨酸蛋白酶类.
通過多級柱層析,從赤子愛勝蚓抽提物(一組抗腫瘤活性蛋白成分)中純化得到凋亡相關絲氨痠蛋白酶1(apoptosis-related serine protease 1, ARSP1),SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)測得其錶觀分子質量為28 ku.ARSP1非變性PAGE圖譜為相連的多條帶,質譜圖為多頭峰,MALDI-TOF-MS測得各主峰相對分子質量為24 645,25 052和25 281,等電聚焦電泳測得等電點pI＜3.8.測得ARSP1 N耑25箇氨基痠序列為:I(V)IGGT(S)N(D)ASPGEFPWQLSQTRGGSHS,N耑序列比較結果顯示其與絲氨痠蛋白酶類高度同源.體外實驗中,不僅通過凋亡細胞的相差顯微觀察驗證瞭ARSP1的細胞殺傷活性,而且進一步通過熒光抗體技術對其直接殺傷細胞活性進行瞭定位研究.Schiffs試劑糖蛋白染色法鑒定ARSP1為糖蛋白(或糖肽),纖維蛋白平闆法測得ARSP1同時具有纖溶酶和纖溶酶原激活酶活性,進一步通過苯甲磺酰氟(PMSF)對其纖溶酶活性的抑製實驗,證明屬于絲氨痠蛋白酶類.
통과다급주층석,종적자애성인추제물(일조항종류활성단백성분)중순화득도조망상관사안산단백매1(apoptosis-related serine protease 1, ARSP1),SDS-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)측득기표관분자질량위28 ku.ARSP1비변성PAGE도보위상련적다조대,질보도위다두봉,MALDI-TOF-MS측득각주봉상대분자질량위24 645,25 052화25 281,등전취초전영측득등전점pI＜3.8.측득ARSP1 N단25개안기산서렬위:I(V)IGGT(S)N(D)ASPGEFPWQLSQTRGGSHS,N단서렬비교결과현시기여사안산단백매류고도동원.체외실험중,불부통과조망세포적상차현미관찰험증료ARSP1적세포살상활성,이차진일보통과형광항체기술대기직접살상세포활성진행료정위연구.Schiffs시제당단백염색법감정ARSP1위당단백(혹당태),섬유단백평판법측득ARSP1동시구유섬용매화섬용매원격활매활성,진일보통과분갑광선불(PMSF)대기섬용매활성적억제실험,증명속우사안산단백매류.
