病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2005年
1期
48-53
,共6页
卢建红%邵卫星%刘玉良%贾立军%韦栋平%石火英%刘秀梵
盧建紅%邵衛星%劉玉良%賈立軍%韋棟平%石火英%劉秀梵
로건홍%소위성%류옥량%가립군%위동평%석화영%류수범
A型流行性感冒病毒%H9N2亚型%共转染%8质粒系统%反向遗传操作技术
A型流行性感冒病毒%H9N2亞型%共轉染%8質粒繫統%反嚮遺傳操作技術
A형류행성감모병독%H9N2아형%공전염%8질립계통%반향유전조작기술
把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠ-polⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因eDNA的质粒组合(6+2重排),共转染COS-1细胞,产生了能在鸡胚中高滴度增殖的H9N2/WSN重组病毒.用A/WSN/33的8个基因cDNA质粒作对照,也产生了转染子病毒.经过EID50测定和MDCK 感染实验,新基因型H9N2/WSN病毒感染鸡胚的能力强(EID50为10-11/0.2ml),而且对鸡胚的毒力弱,在不加胰酶的情况下不使MDCK细胞产生病变.经电镜观察,两个转染子病毒的形态与野生型流感病毒相似.反向遗传操作技术的建立,为对禽流感病毒基因功能和疫苗构建等方面的研究提供了新的手段.
把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神經氨痠酶(NA)基因cDNA剋隆至polⅠ-polⅡ雙嚮轉錄和錶達載體pHW2000,用這兩種質粒與8質粒病毒拯救繫統中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6箇內部基因eDNA的質粒組閤(6+2重排),共轉染COS-1細胞,產生瞭能在鷄胚中高滴度增殖的H9N2/WSN重組病毒.用A/WSN/33的8箇基因cDNA質粒作對照,也產生瞭轉染子病毒.經過EID50測定和MDCK 感染實驗,新基因型H9N2/WSN病毒感染鷄胚的能力彊(EID50為10-11/0.2ml),而且對鷄胚的毒力弱,在不加胰酶的情況下不使MDCK細胞產生病變.經電鏡觀察,兩箇轉染子病毒的形態與野生型流感病毒相似.反嚮遺傳操作技術的建立,為對禽流感病毒基因功能和疫苗構建等方麵的研究提供瞭新的手段.
파금류행성감모(류감)병독A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)적혈응소(HA)화신경안산매(NA)기인cDNA극륭지polⅠ-polⅡ쌍향전록화표체재체pHW2000,용저량충질립여8질립병독증구계통중류감병독A/WSN/33(H1N1)6개내부기인eDNA적질립조합(6+2중배),공전염COS-1세포,산생료능재계배중고적도증식적H9N2/WSN중조병독.용A/WSN/33적8개기인cDNA질립작대조,야산생료전염자병독.경과EID50측정화MDCK 감염실험,신기인형H9N2/WSN병독감염계배적능력강(EID50위10-11/0.2ml),이차대계배적독력약,재불가이매적정황하불사MDCK세포산생병변.경전경관찰,량개전염자병독적형태여야생형류감병독상사.반향유전조작기술적건립,위대금류감병독기인공능화역묘구건등방면적연구제공료신적수단.
