CAJ | 학술논문

目的设计和构建survivin基因的表达siRNA逆转录病毒重组载体,探讨胶质瘤分子病因及用于基因治疗的可行性.方法利用在线软件siDirect设计干扰survivin基因靶序列,合成回文DNA序列退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体双酶切电泳鉴定和测序分析,再转染phoenix细胞产生病毒转染低分化SHG44-9胶质瘤细胞株.利用NIH3T3细胞测定病毒滴度.Western blot测定转染后SHG44-9细胞survivin表达量.结果 pSUPER表达siRNA重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入60 bp序列与原序列一致,位置正确.测定pSUPER.retro-S1、pSUPER.retro-S2病毒滴度值分别为5.5×105 CFU/ml和5.75×105 CFU/ml,干扰效率分别为70.5%和接近100.0%.结论 survivin基因的表达siRNA逆转录病毒重组载体的构建成功,不但为研究胶质瘤分子病因和基因治疗提供了有用工具,而且也为研究高表达survivin的其它肿瘤构建了新的平台.
목적설계화구건survivin기인적표체siRNA역전록병독중조재체,탐토효질류분자병인급용우기인치료적가행성.방법이용재선연건siDirect설계간우survivin기인파서렬,합성회문DNA서렬퇴화후극륭지선성화pSUPER질립재체,중조질립재체쌍매절전영감정화측서분석,재전염phoenix세포산생병독전염저분화SHG44-9효질류세포주.이용NIH3T3세포측정병독적도.Western blot측정전염후SHG44-9세포survivin표체량.결과 pSUPER표체siRNA중조질립재체경쌍매절전영감정화DNA측서분석,증실삽입60 bp서렬여원서렬일치,위치정학.측정pSUPER.retro-S1、pSUPER.retro-S2병독적도치분별위5.5×105 CFU/ml화5.75×105 CFU/ml,간우효솔분별위70.5%화접근100.0%.결론 survivin기인적표체siRNA역전록병독중조재체적구건성공,불단위연구효질류분자병인화기인치료제공료유용공구,이차야위연구고표체survivin적기타종류구건료신적평태.