江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2008年
1期
48-51
,共4页
白细胞介素2%逆转录病毒%载体%筛选
白細胞介素2%逆轉錄病毒%載體%篩選
백세포개소2%역전록병독%재체%사선
从小鼠脾脏淋巴细胞中抽提总RNA,应用RT-PCR技术扩增出mIL-2基因,按常规方法构建T载体,然后克隆、酶切鉴定、测序分析;通过双酶切将该基因片段接入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,脂质体法共转染包装细胞293T;用含病毒颗粒的293T细胞上清液感染L929细胞,加入Zeocin进行筛选,挑选出能稳定表达抗性的L929细胞株,并通过RT-PCR技术检测到转基因L929细胞株中mIL-2基因的转录,表明成功构建了含mIL-2基因的重组逆转录病毒载体并筛选出整合有mIL-2基因的细胞株.
從小鼠脾髒淋巴細胞中抽提總RNA,應用RT-PCR技術擴增齣mIL-2基因,按常規方法構建T載體,然後剋隆、酶切鑒定、測序分析;通過雙酶切將該基因片段接入逆轉錄病毒載體pGEZ-Term中,脂質體法共轉染包裝細胞293T;用含病毒顆粒的293T細胞上清液感染L929細胞,加入Zeocin進行篩選,挑選齣能穩定錶達抗性的L929細胞株,併通過RT-PCR技術檢測到轉基因L929細胞株中mIL-2基因的轉錄,錶明成功構建瞭含mIL-2基因的重組逆轉錄病毒載體併篩選齣整閤有mIL-2基因的細胞株.
종소서비장림파세포중추제총RNA,응용RT-PCR기술확증출mIL-2기인,안상규방법구건T재체,연후극륭、매절감정、측서분석;통과쌍매절장해기인편단접입역전록병독재체pGEZ-Term중,지질체법공전염포장세포293T;용함병독과립적293T세포상청액감염L929세포,가입Zeocin진행사선,도선출능은정표체항성적L929세포주,병통과RT-PCR기술검측도전기인L929세포주중mIL-2기인적전록,표명성공구건료함mIL-2기인적중조역전록병독재체병사선출정합유mIL-2기인적세포주.
