CAJ | 학술논문

目的:建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR)以检测甲、乙型流感病毒.方法:设计甲、乙型流感病毒M基因的特异性引物及双标记探针,优化反应条件,建立双重实时荧光RT-PCR方法(DqRT-PCR).设计甲型流感病毒HA1、HA3亚型的H1、H3、N1、N2基因的特异性引物,建立双重普通RT-PCR(DRT-PCR)方法.对HA1、HA3和B型细胞分离株进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测.对80份发热病人咽拭子标本进行DqRT-PCR和DRT-PCR检测及细胞培养分离病毒.结果:DqRT-PCR检测甲型和乙型靶DNA片段(重组质粒)最低极限为1×103拷贝.DqRT-PCR和DRT-PCR对11株H1N1、16株H3N2和12株乙型细胞分离株检测,符合率100%.DqRT-PCR、DRT-PCR和细胞培养分离病毒对80份咽拭子标本的阳性率分别为:37.5%(30/80)、30.0%(24/80)和43.8%(35/80),检出率差异未见统计学意义(x2=5.5,P＞0.05).与细胞培养分离病毒法比较,DqRT-PCR的阳性和阴性总符合率为73.7%(59/80),阳性预测值为62.9%(22/35),阴性预测值为88.9%(40/45);经配对x2检验,差异无统计学意义(x2=0.76,P＞0.05).结论:建立DqRT-PCR可应用于甲型和乙型流感的检测,以多种检测方法互补将有助于提高临床标本的病毒检出率.
목적:건립쌍중실시형광RT-PCR방법(DqRT-PCR)이검측갑、을형류감병독.방법:설계갑、을형류감병독M기인적특이성인물급쌍표기탐침,우화반응조건,건립쌍중실시형광RT-PCR방법(DqRT-PCR).설계갑형류감병독HA1、HA3아형적H1、H3、N1、N2기인적특이성인물,건립쌍중보통RT-PCR(DRT-PCR)방법.대HA1、HA3화B형세포분리주진행DqRT-PCR화DRT-PCR검측.대80빈발열병인인식자표본진행DqRT-PCR화DRT-PCR검측급세포배양분리병독.결과:DqRT-PCR검측갑형화을형파DNA편단(중조질립)최저겁한위1×103고패.DqRT-PCR화DRT-PCR대11주H1N1、16주H3N2화12주을형세포분리주검측,부합솔100%.DqRT-PCR、DRT-PCR화세포배양분리병독대80빈인식자표본적양성솔분별위:37.5%(30/80)、30.0%(24/80)화43.8%(35/80),검출솔차이미견통계학의의(x2=5.5,P＞0.05).여세포배양분리병독법비교,DqRT-PCR적양성화음성총부합솔위73.7%(59/80),양성예측치위62.9%(22/35),음성예측치위88.9%(40/45);경배대x2검험,차이무통계학의의(x2=0.76,P＞0.05).결론:건립DqRT-PCR가응용우갑형화을형류감적검측,이다충검측방법호보장유조우제고림상표본적병독검출솔.