中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2008年
4期
232-234,246
,共4页
陈大斌%谢勇恩%凌保东%周岐新%张翔%雷军
陳大斌%謝勇恩%凌保東%週岐新%張翔%雷軍
진대빈%사용은%릉보동%주기신%장상%뢰군
超广谱β-内酰胺酶%CTX-M基因%定点突变%酶活性
超廣譜β-內酰胺酶%CTX-M基因%定點突變%酶活性
초엄보β-내선알매%CTX-M기인%정점돌변%매활성
目的 构建CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因突变体,比较突变前、后酶活性的变化,进一步阐明酶的分子结构特征和生化特性.方法 利用重叠延伸PCR定点诱变技术将CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因Ser240(丝氨酸)AGC定点突变为Gly240(甘氨酸)GGC,分别构建CTX-M型酶的原核重组表达载体及其突变表达载体,重组载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌JM109,比较突变前、后酶活性的改变.结果 酶切鉴定和DNA测序鉴定表明CTX-M型酶的原核重组表达载体及其突变表达载体构建成功,转化大肠埃希菌JM109后,发现含野生型CTX-M基因的重组菌其酶活性与来源菌株相近,而含突变型CTX-M基因的重组菌未检测到酶活性.结论 Ser240对于维持CTX-M型超广谱β-内酰胺酶活性具有重要作用.
目的 構建CTX-M型超廣譜β-內酰胺酶基因突變體,比較突變前、後酶活性的變化,進一步闡明酶的分子結構特徵和生化特性.方法 利用重疊延伸PCR定點誘變技術將CTX-M型超廣譜β-內酰胺酶基因Ser240(絲氨痠)AGC定點突變為Gly240(甘氨痠)GGC,分彆構建CTX-M型酶的原覈重組錶達載體及其突變錶達載體,重組載體經酶切鑒定和DNA測序鑒定後,轉化大腸埃希菌JM109,比較突變前、後酶活性的改變.結果 酶切鑒定和DNA測序鑒定錶明CTX-M型酶的原覈重組錶達載體及其突變錶達載體構建成功,轉化大腸埃希菌JM109後,髮現含野生型CTX-M基因的重組菌其酶活性與來源菌株相近,而含突變型CTX-M基因的重組菌未檢測到酶活性.結論 Ser240對于維持CTX-M型超廣譜β-內酰胺酶活性具有重要作用.
목적 구건CTX-M형초엄보β-내선알매기인돌변체,비교돌변전、후매활성적변화,진일보천명매적분자결구특정화생화특성.방법 이용중첩연신PCR정점유변기술장CTX-M형초엄보β-내선알매기인Ser240(사안산)AGC정점돌변위Gly240(감안산)GGC,분별구건CTX-M형매적원핵중조표체재체급기돌변표체재체,중조재체경매절감정화DNA측서감정후,전화대장애희균JM109,비교돌변전、후매활성적개변.결과 매절감정화DNA측서감정표명CTX-M형매적원핵중조표체재체급기돌변표체재체구건성공,전화대장애희균JM109후,발현함야생형CTX-M기인적중조균기매활성여래원균주상근,이함돌변형CTX-M기인적중조균미검측도매활성.결론 Ser240대우유지CTX-M형초엄보β-내선알매활성구유중요작용.
