中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
11期
1002-1005
,共4页
徐静%李树香%刘立成%刘敬%王欣怡%许丽锋%邹检平
徐靜%李樹香%劉立成%劉敬%王訢怡%許麗鋒%鄒檢平
서정%리수향%류립성%류경%왕흔이%허려봉%추검평
血管内皮细胞生长因子%表达%单克隆抗体%ELISA
血管內皮細胞生長因子%錶達%單剋隆抗體%ELISA
혈관내피세포생장인자%표체%단극륭항체%ELISA
目的 表达、纯化血管内皮细胞生长因子(VEGF165)蛋白,并制备其单克隆抗体.方法 将pGEX-4T-1/VEGF165表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达GST-VEGF165融合蛋白,并采用十二烷基肌氨酸钠溶解,亲和层析纯化.用获得的GST-VEGF165蛋白免疫小鼠,制备抗GST-VEGF165单克隆抗体,并进行鉴定及初步应用.结果 表达的GST-VEGF165融合蛋白相对分子质量约为45 000,表达量约占菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度大于90%,并具有与其受体结合的活性,亲和力约为109L/mol.免疫小鼠后,获得1株抗GST-VEGF165的单克隆抗体,反应原性良好,亚类为IgG2a,解离常数为2×10-9mol/L.以此单抗为包被抗体,建它了双抗体夹心ELISA法,VEGF165的最佳检测范围为1.562 5～25 ng/ml.结论 成功表达、纯化了VEGF165蛋白,并制备出VEGF165单克隆抗体,为VEGF检测试剂盒的研制奠定了基础.
目的 錶達、純化血管內皮細胞生長因子(VEGF165)蛋白,併製備其單剋隆抗體.方法 將pGEX-4T-1/VEGF165錶達質粒轉化至大腸桿菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG誘導錶達GST-VEGF165融閤蛋白,併採用十二烷基肌氨痠鈉溶解,親和層析純化.用穫得的GST-VEGF165蛋白免疫小鼠,製備抗GST-VEGF165單剋隆抗體,併進行鑒定及初步應用.結果 錶達的GST-VEGF165融閤蛋白相對分子質量約為45 000,錶達量約佔菌體總蛋白的20%,純化後蛋白純度大于90%,併具有與其受體結閤的活性,親和力約為109L/mol.免疫小鼠後,穫得1株抗GST-VEGF165的單剋隆抗體,反應原性良好,亞類為IgG2a,解離常數為2×10-9mol/L.以此單抗為包被抗體,建它瞭雙抗體夾心ELISA法,VEGF165的最佳檢測範圍為1.562 5～25 ng/ml.結論 成功錶達、純化瞭VEGF165蛋白,併製備齣VEGF165單剋隆抗體,為VEGF檢測試劑盒的研製奠定瞭基礎.
목적 표체、순화혈관내피세포생장인자(VEGF165)단백,병제비기단극륭항체.방법 장pGEX-4T-1/VEGF165표체질립전화지대장간균BL21(DE3)pLysS중,IPTG유도표체GST-VEGF165융합단백,병채용십이완기기안산납용해,친화층석순화.용획득적GST-VEGF165단백면역소서,제비항GST-VEGF165단극륭항체,병진행감정급초보응용.결과 표체적GST-VEGF165융합단백상대분자질량약위45 000,표체량약점균체총단백적20%,순화후단백순도대우90%,병구유여기수체결합적활성,친화력약위109L/mol.면역소서후,획득1주항GST-VEGF165적단극륭항체,반응원성량호,아류위IgG2a,해리상수위2×10-9mol/L.이차단항위포피항체,건타료쌍항체협심ELISA법,VEGF165적최가검측범위위1.562 5～25 ng/ml.결론 성공표체、순화료VEGF165단백,병제비출VEGF165단극륭항체,위VEGF검측시제합적연제전정료기출.
